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MéTODO E KIT DE ENSAIO PARA A DETERMINAçãO DE ATIVIDADE DE TIMIDINA CINASE EM UMA AMOSTRA BIOLóGICA, USO DE MéTODO E/OU DE KIT DE ENSAIO, MéTODO PARA USO EM DIAGNóSTICO, MONITORAçãO E/OU PROGNóSTICO DE DOENçAS OU DISTúRBIOS DE PROLIFERAçãO CELULAR, E, MéTODO PARA USO EM TRIAGEM DE COMPOSTOS. São descritos um método e um kit de ensaio para a determinação da atividade de timidina cinase (TK) em uma amostra biológica, tal como sangue, soro, plasma, Fluido Cérebro-Espinhal (CSF), fluido pleural, ascite, tecidos, células e seus extratos. O método compreende contatar com a amostra biológica, em um tampão, uma Mistura Reacional Básica compreendendo: gabarito e/ou iniciador ligado em superficie sólida, um desoxinucleosídeo modificado, tal como Bromo-desóxiUridina, Iodo- desóxiUridina, Fluoro-desóxiUridina ou Vinil-desóxiUridina como um substrato enzima cinase, um doador de fosfato, uma enzima polimerizadora de nucleosídeo, e uma fonte de enzima destituída de atividade de TK, tal como um extrato de levedura. Após a incubação é determinada a quantidade de desoxinucleosídeo modificado que tem sido incorporado no gabarito e/ou iniciador ligado em superficie sólida, e a atividade de TK presente na amostra biológica é diretamente proporcional à quantidade de desoxinucleosídeo modificado incorporado. O método e o kit de ensaio são úteis em diagnóstico, prognóstico, monitoração de progressão de doença e efeitos de tratamento de doenças ou distúrbios de proliferação celular, tal como câncer, e na triagem de compostos, e.g. novos candidatos de droga, afetando vias enzimáticas, que podem obstruir a formação de timidina fosfatos ou interferir com a síntese de ácido nucleico. |
