甘薯商19的脱毒快繁方法

摘要

甘薯商19的脱毒快繁技术是从正在生长的植株中，选择生长健壮，无病虫，具有本品种特征特性的植株，剪取带有茎尖的茎蔓，去掉可见叶，消毒灭菌，利用解剖针剥离茎尖含1-2个叶原基，快速接种到分化与诱导培养基中；通过病毒检测后，将脱毒无菌苗剪成带有1-2个节间的茎段转接到增殖培养基中；选取生长势强、健壮的无菌芽苗切成含有1-2个节间的小段转入生根培养基中，生根后进行练苗。本技术茎尖脱毒、茎段快繁，解决了用薯块、薯蔓繁殖导致甘薯病毒病严重、使新育品种品质变劣、种质退化、产量降低等难题；可人为的控制培养生长条件，不受自然条件的影响，取材量小，培养材料经济，生长周期短，繁殖系数大，管理方便，利于产业化生产。

主权项

甘薯商19的脱毒快繁方法，其具体步骤是：(1)、分化培养：从正在生长的植株中，选择生长健壮，无病虫，具有本品种特征特性的植株，剪取带有茎尖的茎蔓，去掉可见叶，在流动的自来水中冲洗，拮干水分，在无菌室内的超净工作台上，用重量百分比为75％的酒精浸泡20秒钟，重量百分比为0.1％的升汞溶液灭菌8‑12分钟，无菌水冲洗5‑7遍，在60‑80倍解剖镜下，利用解剖针剥离茎尖，所剥茎尖为0.1‑0.3毫米，带1‑2个叶原基，快速接种到分化与诱导培养基中，然后在温度26±2℃，日照时数12‑14h，光照强度2200‑2500LX的条件下培养，20天后重新转入分化与诱导培养基中继续培养，40‑50天后培养瓶内小苗长出5‑7片叶，除去病苗弱苗，其余的进行编号并快繁一次，待苗子长出7‑9片叶时即可以进行病毒检测；(2)、茎尖苗带毒检测先目测，把带毒症状明显的茎尖苗除去，用血清学检测法对商薯19茎尖苗进行检测，去除带有对甘薯危害严重的甘薯羽状斑驳病毒、甘薯潜隐病毒、甘薯类花叶病毒的茎尖苗；(3)、增殖培养通过病毒检测后，不符合标准的全部淘汰，剩下的无毒苗加速快繁，在超净工作台上，将脱毒无菌苗剪成带有1‑2个节间的茎段转接到继代与增殖培养基中进行增殖培养，PH 5.6‑5.8，在温度26‑28℃，光照12‑14h/d，光照强度2000‑2500lx，湿度65‑70％的环境条件下进行培养，20‑25天后可形成4‑5个丛生芽，28‑35天生长高度5cm左右，即可在同一培养基上继代繁殖，继代周期为25‑28天；(4)、生根培养选取生长势强、健壮的无菌芽苗切成含有1‑2个节间的小段，长1.0‑1.5cm，转入生根培养基中，25‑28天，有95％以上的植株长出3‑5条0.3‑3cm长的根，展开叶3‑5片，待苗长至30‑35d时，即可炼苗移栽，培养温度26±2℃，湿度65‑75％，光照强度2200‑2500LX，光照时间12‑14h/d；(5)、炼苗与移栽练苗前首先揭开培养瓶的封口膜，练苗时间5‑7天，练苗时在保证温、湿度的条件下，逐步接近自然环境，以利提高成活率，然后小心取出，用自来水冲洗净苗基部的培养基，并灭菌，然后移栽到已灭过菌的腐殖质与碎炉渣以2∶1的比例混合的基质中，前期适当遮阴并保持湿度在90％，逐步降至70‑75％，15天后去掉薄膜罩，定期杀菌，7‑10天一次，共计2‑3次；其中分化与诱导培养基的配比是：MS基本培养基1升、6‑苄基腺嘌呤6‑BA1.0‑3.5mg、a‑奈乙酸NAA 0.5‑3.0mg、2.4‑二氯苯氧乙酸2.4‑D 0.2‑2.5mg、玉米素ZT 0.1‑0.3mg、椰汁100‑200mg、蔗糖30g、琼脂6.5g；继代与增殖培养基的配比是：MS基本培养基1升、6‑苄基腺嘌呤6‑BA1.0‑3.0mg、a‑奈乙酸NAA 0.5‑2.0mg、吲哚丁酸I BA 0.2‑1.5mg、玉米素ZT 0.1‑0.3mg、蔗糖30g、琼脂6g；生根培养基的配比是：1/2MS基本培养基1升、a‑奈乙酸NAA 0.5‑2.0mg、蔗糖20g、琼脂6g。