一种固定化微生物细胞转化神经节苷脂的方法

摘要

本发明公开了一种固定化微生物细胞转化神经节苷脂的方法，能够专一性转化神经节苷脂生成单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)，解决了酸法水解转化率低、容易产生无活性脱唾液酸神经节苷脂的问题，同时解决了非固定化细胞转化法容易掺入培养基成分或微生物代谢物杂质的问题。本发明用丝素凝胶固定化细胞后填充柱型反应床，在一定反应条件下将待转化神经节苷脂反向流过填充柱，将神经节苷脂转化为GM1。

主权项

一种固定化微生物细胞转化神经节苷脂的方法，包括以下步骤：a. 培养转化神经节苷脂的菌株，离心收集细胞；b. 制备蚕丝素凝胶作为固定化材料：将家蚕蚕丝下脚料粉碎后用纯净水浸泡，高温条件下进行脱胶处理，丝素脱胶温度为110℃~130℃，时间为1~3小时，用纯净水洗净后加热溶解于氯化钙溶液中，过滤后减压浓缩至浓度为80g/L ~120g/L，即获得家蚕丝素水凝胶；c. 用固定化材料固定化细胞：固定化方法是包埋和交联相结合，在无菌条件下，将丝素水凝胶加热溶解与菌体混匀后放置在4℃冷却凝结，然后切成小块，将包埋菌体的凝胶块在含有浓度为1%~1.5%的戊二醛溶液中交联处理1~2小时，用纯净水洗涤干净后再置于KCl溶液中浸泡硬化，用纯净水洗涤干净后放置4℃保存待用；d. 制备转化反应缓冲液：缓冲液组成为2%磷酸氢二铵，1.5%磷酸二氢钾，0.5%硫酸镁，0.5%醋酸钠，0.05%硫酸钙，pH值为5.0~6.5；e. 将固定化微生物细胞悬浮于反应缓冲液中填充反应柱装置；f. 在3~6mL/min流速、25℃~30℃温度条件下将神经节苷脂逆向流经反应柱，进行生物转化反应，使神经节苷脂转化为单唾液酸四己糖神经节苷脂（GM1）。