一种检测肺炎球菌的免疫层析试纸及其制备方法

摘要

本发明公开了一种检测肺炎球菌的免疫层析试纸及其制备方法。该试纸包括样品垫、紧密连接于所述样品垫的含有金黄色葡萄球菌蛋白A标记胶体金探针的金标垫、与所述金标垫紧密连接的纤维素膜和紧密连接于所述纤维素膜另一端的吸水垫；所述纤维素膜上设有相互分离的一条检测线和一条质控线；所述检测线含有肺炎球菌表面粘附素A，所述质控线含有能与所述金黄色葡萄球菌蛋白A特异结合的抗体。本发明的免疫层析试纸具有简便性、敏感性、特异性和快速性的优点，适于临床和现场使用。

主权项

一种检测肺炎球菌的免疫层析试纸，包括样品垫、紧密连接于所述样品垫的含有金黄色葡萄球菌蛋白A标记胶体金探针的金标垫、与所述金标垫紧密连接的纤维素膜和紧密连接于所述纤维素膜另一端的吸水垫；所述纤维素膜上设有相互分离的一条检测线和一条质控线；所述检测线含有肺炎球菌表面粘附素A，所述质控线含有能与所述金黄色葡萄球菌蛋白A特异结合的抗体；所述检测肺炎球菌的免疫层析试纸的制备方法，包括以下步骤：1)将肺炎球菌表面粘附素A溶液喷到纤维素膜上形成检测线，将能与金黄色葡萄球菌蛋白A特异结合的抗体溶液喷到所述纤维膜的另一区域形成质控线，然后将吸水垫粘贴在所述纤维素膜的远离所述检测线的一端；2)制备金黄色葡萄球菌蛋白A标记的免疫胶体金探针溶液，将玻璃纤维膜或聚脂膜浸入该免疫胶体金探针溶液，得到金标垫，将其粘贴在步骤1)得到的纤维素膜的靠近所述检测线的一端；3)将在步骤2)中得到的金标垫上远离所述检测线的一端粘贴样品垫，得到检测肺炎球菌的免疫层析试纸；所述步骤1)中肺炎球菌表面粘附素A为野生型肺炎球菌表面粘附素A或经发酵表达的重组肺炎球菌表面粘附素A；所述检测线含有的肺炎球菌表面粘附素A的浓度为2.0‑4.0mg/mL，所述质控线含有的能与所述金黄色葡萄球菌蛋白A特异结合的抗体的浓度为2.0‑4.0mg/mL；将喷有肺炎球菌表面粘附素A溶液和金黄色葡萄球菌蛋白A特异性抗体溶液的纤维素膜先在37℃下干燥2‑4小时，再粘贴吸水垫；向所述步骤2)中的金黄色葡萄球菌蛋白A标记的免疫胶体金探针溶液中添加0.05‑0.1g/mL蔗糖；将金标垫在‑20℃至‑50℃冷冻5‑8小时，并将其冷冻抽干后，再与纤维素膜粘贴；所述金黄色葡萄球菌蛋白A标记的胶体金探针溶液的制备方法，包括以下步骤：1)将质量百分浓度为0.01％的氯化金水溶液加热煮沸，并将每100mL 0.01％HAuCl4溶液进行如下操作：搅动下加入1.6‑1.8mL质量百分浓度为1％的柠檬酸三钠水溶液，继续煮沸，直到液体颜色稳定成葡萄酒红色，得到胶体金溶液；2)将步骤1)获得的胶体金溶液的pH值调至6‑6.5，每100mL胶体金溶液加入终浓度为8‑12μg/mL的金黄色葡萄球菌蛋白A，搅拌20‑30分钟，然后加入1‑3mL 10％PEG20000，继续搅拌20‑30分钟，在9000‑13000rpm下离心25‑35分钟，弃上清，沉淀即为金黄色葡萄球菌蛋白A标记的胶体金探针； 3)将金黄色葡萄球菌蛋白A标记的胶体金探针保存于质量百分浓度0.25‑0.4％的四硼酸钠溶液中，得到金黄色葡萄球菌蛋白A标记的胶体金探针溶液。