一种利用环介导等温扩增技术检测创伤弧菌的试剂盒

摘要

本发明涉及一种利用环介导等温扩增(LAMP)技术检测创伤弧菌(Vibrio vulnificus)的试剂盒和检测方法，属于病原菌诊断领域。主要技术方案是利用LAMP技术，针对创伤弧菌毒性相关基因(virulence-correlated gene)的六个区域，设计四条高特异性引物，达到特异性检测创伤弧菌的目的。与传统方法相比，该方法所需设备和操作步骤简单，而且具有快速，高特异性，稳定性强以及灵敏度高等优点，检测成本较低，适合普通诊所和野外检验。

主权项

一种利用环介导等温扩增技术检测创伤弧菌的试剂盒，其特征在于，它包括如下成分及各成分的作用浓度：(1)特异性寡核苷酸引物：vvFIP、vvBIP、vvF3、vvB3，各引物浓度均为5‑15μmol/L；vvFIP：5’GCGCTAATGCGAGGAGTGAGCTTTCAAATAGGAGCCGCCGATTGC 3’vvBIP：5’TCTATGAGTTATCGGGGCTCATTTGCTAGTTAAAGCCGTCCAGTCG 3’vvF3：5’TCGCCTTTCTCAGTGTTGGAG 3’vvB3：5’TACGCTCTTAACCGTATCGTA 3’(2)DNA提取试剂：TE缓冲液，配方为5‑15mmol/L Tris，0.5‑1.5mmol/L EDTA，pH 8.0；10％十二烷基磺酸钠；10‑20mg/mL蛋白酶K溶液，pH8.0；Tris饱和酚，pH8.0；2‑5mol/L乙酸钠；95％乙醇；(3)环介导等温扩增试剂管成分为：10×反应缓冲液，配方为pH 8.8的200mmol/L Tris‑HCl，100mmol/L KCl，100mmol/L(NH4)2SO4，20mmol/L MgSO4，1％Triton X‑100；(4)dNTPs，即dATP，dTTP，dCTP，dGTP的混合物，每种浓度为5‑15mmol/L；(5)双蒸水；(6)8u/μL Bst DNA聚合酶。