主权项 |
一种褐飞虱对苯基吡唑类杀虫剂抗药性分子检测方法,其特征在于如下步骤实现:a、提取单头褐飞虱2‑3龄若虫基因组DNA;b、PCR反应体系2.5 μL 10×Buffer,1.25 U Ex‑Taq DNA polymerase,2.5 μL单头褐飞虱基因组DNA,终浓度0.2 mmol/L的dNTPs、 1 mmol/L的 MgCl2,1 μmol/L的内引物、外引物,加双蒸水至反应总体积为25 μL;其中所述的外引物 P:GGCTGATCGTCATCATATCGTGG; Q:GCAACGACGCGAACACCATGACG;内引物 A:TGCGACACCGGCACGAGTGT;B:CGGTGGTGACGCCGAGTGC;c、PCR反应程序94 ℃ 3 min;20循环:94℃ 30 s,67-58℃ 30 s,每2个循环降1℃,72 ℃ 1 min;10循环:94℃ 30 s,58℃ 30 s,72 ℃ 1 min;72 ℃ 5 min;d、扩增产物的电泳检测:取10 µL PCR扩增产物,在1%g/mL的琼脂糖凝胶上进行电泳,紫外光下检测:存在长度分别约为200 bp 和 150 bp 大小的两条带,说明个体为抗性纯合子;存在长度分别约为200 bp 和80 bp 大小的两条带,说明个体为敏感纯合子;同时存在长度分别约为200 bp 、150 bp和 80 bp大小的三条带,说明个体为杂合子。 |