一种透明质酸的制备方法

摘要

本发明是一种生产透明质酸的方法。该方法是通过构建透明质酸合成酶基因Has和尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶基因在大肠杆菌表达的重组表达载体，将该重组表达载体转化大肠杆菌获得工程大肠杆菌，发酵该工程大肠杆菌得到透明质酸。该方法提高生产透明质酸的产量达到2.5g/L,比现有技术通过大肠杆菌中表达革兰氏阳性链锁状球菌HA合成基因spHas获得的最高HA产量提高近10倍。

主权项

一种透明质酸的制备方法，其特征在于用工程大肠杆菌pHK/JM109生产透明质酸的摇瓶培养合成按以下进行： 在500ml‑2500ml 三角瓶中，以总体积100ml‑500ml 含25‑50 mM K2HPO4•3H2O, pH6.5‑7.2，2‑4mM g/L MgSO4•7H2O, 20‑40 mM/L 柠檬酸, 1‑2 mM MnCl2, 300‑400 mM 葡萄糖50‑75 mM 氮乙酰葡萄糖胺,5‑10 mM 乳糖、10‑30 g/L 甘油、3‑5g/L酪蛋白酸水解物( Casamino acid)的体系中加入已表达pmHas和kfiD的pHK/JM109，使菌体细胞浓度达4‑5% W/V, 发酵条件为30‑33 ℃，250 rpm，并用28% V/V的氨水调节pH至中性，发酵反应时间为30‑36小时。