宫内膜干细胞定向诱导胰岛素分泌细胞的方法

摘要

本发明公开了一种宫内膜干细胞定向诱导胰岛素分泌细胞的方法，包括以下步骤：1)宫内膜干细胞的分离培养和扩增；2)体外诱导分化：将上述步骤1)所得的第4～6代生长状况良好的细胞以胰酶消化，当显微镜下见细胞变为单个圆形时即以含体积浓度为13～17％胎牛血清的DMEM培养基终止消化，离心，所得的细胞沉淀用PBS清洗；在上述PBS清洗后的细胞中加入诱导培养基置于4～6％CO2、94～96％饱和湿度的36～38℃培养箱中培养；培养13～15天，得胰岛素分泌细胞。所得的胰岛素分泌细胞用于治疗糖尿病，从而为干细胞治疗提供新的种子资源。

主权项

宫内膜干细胞定向诱导胰岛素分泌细胞的方法，其特征是包括以下步骤：1)、宫内膜干细胞的分离培养和扩增：将经血经含抗生素的杀菌液的杀菌处理后，离心，去上清液；然后加入Chang氏通用培养基置于4～6％CO2、94～96％饱和湿度的36～38℃培养箱中培养；培养5～7天后换液去除未贴壁细胞；一旦细胞生长至75～85％汇合度时，即采用胰酶消化传代；2)、体外诱导分化：将上述步骤1)所得的第4～6代生长状况良好的细胞以胰酶消化，当显微镜下见细胞变为单个圆形时即以含体积浓度为13～17％胎牛血清的DMEM培养基终止消化，离心，所得的细胞沉淀用PBS清洗；在上述PBS清洗后的细胞中加入诱导培养基置于4～6％CO2、94～96％饱和湿度的36～38℃培养箱中培养；每5×105个的细胞中加入0.8～1.2ml诱导培养基，所述诱导培养基为：低糖DMEM培养基，0.9～1.1％非必需氨基酸，0.09～0.11mmol/L β‑巯基乙醇，0.9～1.1mmol/L谷氨酰胺，4～6μg/L碱性成纤维细胞生长因子；每2～3天半量换液，培养13～15天，得胰岛素分泌细胞。