一种EV71病毒样颗粒及以其制备的手足口病疫苗

摘要

本发明涉及一种EV71病毒样颗粒及以其制备的手足口病疫苗，所述EV71病毒样颗粒按照以下步骤制备：(1)重组质粒的构建：用肠道病毒EV71的P1蛋白基因和3CD蛋白酶基因与pGAPZαA质粒分别连接后构建P1-pGAPZαA和3CD-pGAPZαA重组质粒；(2)重组质粒转入表达菌株：所述重组质粒依次转入毕赤酵母SMD1168表达菌株，得到P1-pGAPZαA-3CD-pGAPZαA-SMD1168重组表达菌株；(3)菌体培养及EV71病毒样颗粒纯化：培养所述毕赤酵母重组表达菌株，离心分离上清液，所述上清液经超速离心后的沉淀用蔗糖密度梯度离心，获得EV71病毒样颗粒。本发明的EV71病毒样颗粒易于通过菌体培养获得，稳定性好、易于纯化，适于制备疫苗，且便于工业化生产。

主权项

一种EV71病毒样颗粒，其特征在于，所述EV71病毒样颗粒的制备方法包括：(1)重组质粒的构建：用EV71病毒的P1蛋白基因和3CD蛋白酶基因与pGAPZαA质粒分别连接后构建P1‑pGAPZαA和3CD‑pGAPZαA重组质粒；(2)重组质粒转入表达菌株：所述重组质粒依次转入毕赤酵母SMD1168表达菌株，得到P1‑pGAPZαA‑3CD‑pGAPZαA‑SMD1168毕赤酵母重组表达菌株；(3)菌体培养及EV71病毒样颗粒纯化：培养所述毕赤酵母重组表达菌株，离心分离上清液，所述上清液经超速离心后的沉淀用蔗糖密度梯度离心，获得EV71病毒样颗粒。