método para a detecção e quantificação múltipla e simultánea de patogênicos mediante a reação em cadeia da polimerasa em tempo real

摘要

MéTODO PARA A DETECçãO E QUANTIFICAçãO MúLTIPLA E SIMULTáNEA DE PATOGENICOS MEDIANTE A REAçãO EM CADEIA DA POLIMERASA EM TEMPO REAL. A presente invenção refere-se a um método para a detecção e quantificação múltipla e simultânea de qualquer combinação de Listeria sp, Staphylococcus aureus, Campylobacter jejuni e/ou Escherichia coli O157:H7, em amostra(s) de ensaio por reação de amplificação múltiplex com emprego da reação em cadeia da polimerasa (PCR) em tempo real, o método utiliza as seguintes etapas: (a) extrair ADN presente na amostra ou amostras de ensaio; (b) preparar uma mistura de reação específica para os patogênicos a detectar e quantificar, com a mistura de reação contendo os reagentes necessários para a amplificação enzimática do ADN extraído e identificação dos patogênicos; (c) amplificar, mediante reação de amplificação múltiplex empregando POR, a mistura de reação; e (d) determinar simultaneamente a presença ou ausência e quantificação dos patogênicos na amostra ou amostras de ensaio. o método apresenta a particularidade de que: (i) a mistura de reação para a amplificação enzimática do ADN conta jogos de pares de iniciadores oligonucleotideos identificados como SFQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4 e SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7 e SEQ ID NO: 8, e SEQ ID NO: 10 e SEQ ID NO: 11, e sondas com seqüências oligonucleotideos identificadas como SEQ ID NO: 3, SF0 ID NO: 6, SEO lO NO: 9 e SF0 ID NO: 12; (ii) a presença ou ausência e quantificação de patogênicos em qualquer combinação é determinada por sinal fluorescente ou emissão de fluorescência especifica de cada patogênico.