发明名称 | 一种克隆山羊TNNC2基因编码区全序列的方法 | ||
摘要 | 本发明公开了一种克隆山羊TNNC2基因编码区全序列的方法,包括以下步骤:A1、提取山羊眼肌组织中的总RNA,然后将总RNA反转录成cDNA;A2、引物的设计及PCR反应:设计一对简并引物,上游引物在起始密码子的上游区域设计,下游引物在终止密码子的下游区域设计;设计的引物为:上游引物P1:5′-TGATGACGGACCAGCAGG-3′下游引物P2:5′-CTTCTTACTGCACGCCCTC-3′。A3、PCR产物的回收和纯化;A4、克隆。提供一种简单、快捷的获取山羊TNNC2基因的完整编码区序列的方法,填补了该基因在山羊上的空白,为进一步研究山羊的该基因奠定了基础。 | ||
申请公布号 | CN102146372A | 申请公布日期 | 2011.08.10 |
申请号 | CN201110024891.0 | 申请日期 | 2011.01.24 |
申请人 | 四川农业大学 | 发明人 | 陈浩林;徐刚毅;汪代华;徐洪刚 |
分类号 | C12N15/10(2006.01)I | 主分类号 | C12N15/10(2006.01)I |
代理机构 | 代理人 | ||
主权项 | 一种克隆山羊TNNC2基因编码区全序列的方法,其特征在于,包括以下步骤:A1、提取山羊眼肌组织中的总RNA,然后将总RNA反转录成cDNA;A2、引物的设计及PCR反应:设计一对简并引物,上游引物在起始密码子的上游区域设计,下游引物在终止密码子的下游区域设计;设计的引物为:上游引物P 1:5′‑TGATGACGGACCAGCAGG‑3′下游引物P2:5′‑CTTCTTACTGCACGCCCTC‑3′用cDNA为模板进行梯度PCR操作扩增TNNC2基因,温度为范围在50℃到65℃之间的8个温度点.PCR反应体系为10ul体系(5μL的2×Master Mix Tap,上下游引物各0.5μL,2μL的cDNA,2μL的ddH2O.),反应条件为95℃预变性5min,35个循环(94℃,40s;50℃~60℃,40s;72℃,50s),最后72℃10min。A3、PCR产物的回收和纯化;A4、克隆。 | ||
地址 | 625014 四川省雅安市新康路46号 |