罗汉果甜苷V特异性抗血清的制备及检测方法

摘要

本发明公开了一种罗汉果甜苷V特异性抗血清的制备及检测方法，该方法用人工抗原罗汉果甜苷V-丁二酸酯－牛血清蛋白复合物免疫BALB/c小鼠，末次免疫后3天摘除眼球采血，3000rpm离心5分钟，收集血清-20℃保存制得罗汉果甜苷V抗血清；用人工抗原罗汉果甜苷V-丁二酸酯－人血清蛋白复合物为包被抗原，采用间接酶联免疫吸附分析法和按方阵法确定抗血清的最适工作浓度、效价，检测罗汉果甜苷V对抗体的抑制反应，筛选确定罗汉果甜苷V特异性抗血清。本发明的优点是：罗汉果甜苷V特异性抗血清制备方法简单；检测罗汉果甜苷V特异性抗血清的方法可靠。

主权项

1.罗汉果甜苷V的特异性抗体血清的制备方法，包括如下步骤：  1）制备免疫用人工抗原罗汉果甜苷V-HS－BSA，其分子结构式为：经红外光谱和紫外光谱确定其结合比比在25.9~61.7之间；2）动物免疫：实验动物选用雌性BALB/c 小鼠，实验免疫用人工抗原罗汉果甜苷V-HS－BSA的剂量为100μg/只，用PH7.2 PBS溶液稀释抗原，首次免疫加等量弗氏佐剂，制成乳化剂，腹腔注射，2周后追加免疫加等量弗氏不完全佐剂，制成乳化剂，腹腔注射，以后每隔2周腹腔注射上述浓度为200μg/ml的人工抗原0.5ml，共加强免疫3次；3）抗血清的制备：末次免疫后3天摘除眼球采血，3000rpm离心5分钟，收集血清-20℃保存即成。