从福尔马林固定石蜡包埋组织中提取脱氧核糖核酸的方法

摘要

本发明涉及一种从福尔马林固定的石蜡包埋组织中提取脱氧核糖核酸的方法，属于生物中核酸应用技术领域。首先配制特制裂解液，将裂解液加入到石蜡切片组织中，高温煮沸30分钟，离心取清夜，再加入无水乙醇混匀，将混合液加到硅膜吸附柱中离心，再经过去蛋白液和去盐漂洗液漂洗，最后用洗脱缓冲液洗脱即可。本发明方法不用有毒试剂二甲苯脱腊，不会给实验人员带来身体上的伤害；不需要昂贵的蛋白酶K长时间孵育酶解，操作简单、快速、提取基因组脱氧核糖核酸质量高，稳定性好，可最大程度的节省成本和时间。提取产物进行PCR检测，可扩增得到约750bp的长片段，极大的方便了科研和生物医学等方面的工作。

主权项

一种从福尔马林固定的石蜡包埋的组织中提取脱氧核糖核酸的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：(1)将2～4片10微米厚的石蜡包埋组织切片放在500微升、摩尔浓度为0.1的氢氧化钠溶液中，再加入50微升、质量百分比浓度为20％的十二烷基硫酸钠和50微升、摩尔浓度为0.001的二硫苏糖醇，充分混匀，100℃下孵育30分钟，得到裂解液；(2)对上述裂解液进行离心分层，离心分层的转速为1,3200转/分钟，离心分层时间为5分钟，取出离心分层后的中间层，加入500微升无水乙醇，充分振荡混匀，得到混合液；(3)将上述混合液加入硅膜吸附柱中，进行离心吸附，离心吸附的转速为8000转/分钟，离心吸附时间为3分钟，倒去废液；(4)向上述步骤(3)硅膜吸附柱中加入500微升去蛋白缓冲液，进行离心去蛋白，离心去蛋白的转速为8000转/分钟，离心去蛋白的时间为3分钟，倒掉废液；(5)向上述步骤(4)的硅膜吸附柱中加入700微升去盐漂洗液，进行离心去盐，离心去盐的转速为8000转/分钟，离心去盐时间为3分钟，倒掉废液；重复该步骤一次；(6)对上述步骤(5)的硅膜吸附柱进行离心干燥，离心干燥的转速为1,2000转/分钟，离心干燥时间为2分钟；(7)向步骤(6)的硅膜吸附柱中加入50微升洗脱缓冲液，室温下放置2～5分钟后，进行洗脱离心，洗脱离心的转速为1,2000转/分钟，洗脱离心的时间为2分钟，得到脱氧核糖核酸溶液。