H5亚型高致病性禽流感病毒血凝素蛋白及其制备方法

摘要

一种H5亚型高致病性禽流感病毒血凝素基因抗原蛋白，属于生物技术领域，特别是涉及一种H5亚型禽流感病毒基因抗原蛋白。本发明提供一种能有效检测致病致死率极高的禽流感H5亚型的HA抗体的H5亚型高致病性禽流感病毒血凝素基因抗原蛋白。本发明首先将pUCM-TH5HA质粒由BamH I、EcoRV双酶切，得到的pPIC9K质粒由EcoR I线性化，再经T4连接酶连接获得质粒pPIC9K-H5HA；用SalI线性化pPIC9K-H5HA重组质粒，经过一系列工作后即得到H5HA抗原蛋白。本发明表达量高、特异性强、易于纯化、具有完整的空间构象等特点完全符合ELISA快速检测试剂盒的鉴定要求。

主权项

一种H5亚型高致病性禽流感病毒血凝素蛋白的制备方法，其特征在于：首先将含有如序列表中SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列的pUCM‑TH5HA质粒由BamH I、EcoRV双酶切，经补平后回收得到目的片段；pPIC9K质粒由EcoR I线性化，两端分别补平、去磷后回收；将以上回收产物经T4连接酶连接后即获得目的质粒pPIC9K‑H5HA；再用SalI线性化pPIC9K‑H5HA重组质粒，线性化后将其电转化至GS115感受态中，再在MD平板中培养，而后挑取单个菌落于YPD培养基中复苏，提重组体基因组进行PCR鉴定，筛选出的阳性菌株于BMGY培养基中摇菌，离心后转至BMMY培养基中开始甲醇诱导表达，诱导表达条件是大于80％的溶解氧、1％甲醇诱导、培养4天、摇瓶转速大于200rpm、培养基pH值为6.0，产物离心后取上清，加入饱和硫酸铵沉淀蛋白，收集蛋白进行进一步纯化即得到HSHA抗原蛋白。