滇海水仙花四倍体植株的培育方法

摘要

本发明提供一种滇海水仙花四倍体植株的培育方法，它将灭菌后的种子在无菌条件下接种在诱导培养基上，在光照强度为800～1200Lx，光照时间为10～12h/d，温度为22～26℃的条件下，诱导培养2～3d，在培养基表面，按12～20μL/cm2的量注入浓度为0.1～0.4g/L的秋水仙素溶液，使种子浸泡在秋水仙素溶液中12～48h，取出种子，用无菌水清洗1～3次，接种在新的诱导培养基上，继续培养30～35d，得叶片宽大、厚度厚、叶色深、叶脉粗的滇海水仙花四倍体植株。本发明有效提高多倍体发生频率，增殖或生根后，选取具有多倍体特征的无菌植株的叶片离体培养或用多倍体的丛生芽继续增殖，可在短期内繁殖出大量的多倍体植株。该种方法操作简单，容易控制试验条件和重复试验结果，提高工作效率，既能保持原品种的优良性状，又可使花器官增大，色彩更好，观赏价值和商品价值更高。

主权项

一种滇海水仙花四倍体植株的培育方法，其特征在于包括下列各步骤：（1）将灭菌后的种子在无菌条件下接种在下列诱导培养基上：MS基本培养液6‑苄基氨基嘌呤6‑BA           0.1～0.3 mg/L萘乙酸NAA                         0.1 mg/L蔗糖                             30000 mg/L琼脂                              6500 mg/LpH                                 5.5～5.8在光照强度为800～1200Lx，光照时间为10～12h/d，温度为22～26℃的条件下，诱导培养2～3d；（2）在步骤（1）的接种了种子的培养基表面，按12～20μL/cm2的量，注入浓度为0.1～0.4g/L的秋水仙素溶液，使种子浸泡在秋水仙素溶液中12～48h，取出种子，用无菌水清洗1～3次；（3）在无菌条件下，将步骤（2）的种子接种到新的与步骤（1）相同的培养基中，在光照时间为10～12h/d，光照强度为800～1200Lx，温度为22～26℃的条件下，培养30～35d，得幼苗； （4）将（3）步骤的幼苗接种在MS培养基上，在光照强度为800～1200Lx，光照时间为10～12h/d，温度为22～26℃的条件下，生根培养30～40d，得到叶片大而厚，且颜色深，叶脉粗，丛生性强的滇海水仙花四倍体植株及嵌合体植株，滇海水仙花四倍体植株直接移栽至大田，或者再用滇海水仙花四倍体植株按常规进行扩繁后，得大量滇海水仙花四倍体植株，移栽；（5）将（4）步骤得到的滇海水仙花嵌合体植株进行下列处理：1）切割分离滇海水仙花嵌合体浸泡后膨大的生长点或变异的叶片，接种到与步骤（1）相同的诱导培养基中，在光照时间为10～12h/d，光照强度为800～1200Lx，温度为22～26℃的条件下，培养20～25d，得幼苗； 2）将1）步骤的幼苗接种在不含激素的MS培养基上，在光照强度为800～1200Lx，光照时间为10～12h/d，温度为22～26℃的条件下，生根培养30～40d，得到叶片大而厚，且颜色深，叶脉粗，丛生性强的滇海水仙花四倍体植株及嵌合体植株；3）对2）步骤的滇海水仙花嵌合体重复1）、2）步骤，以防止回复成二倍体，直至得到稳定的四倍体植株；将2）步骤的滇海水仙四倍体植株直接移栽至大田，或者再用滇海水仙花四倍体植株按常规进行扩繁后，得大量滇海水仙花四倍体植株，移栽。