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一种在绞股蓝中制备中性多糖的方法，其特征在于中性多糖的制备由3步实现：先自绞股蓝中制备得到粗多糖，然后制得精制多糖，由精制多糖制备得到中性多糖；具体步骤如下：步骤1：将95％乙醇加入到水分干燥的绞股蓝中，在50±2℃的温度下搅拌1小时，然后过滤收集滤渣；再将滤渣采用95％乙醇在50±2℃回流搅拌1小时后过滤收集滤渣；再将滤渣采用95％乙醇在50±2℃回流搅拌1小时后过滤收集滤渣；将滤渣自然风干后加入6‑10倍相对滤渣质量重的蒸馏水，在90‑95℃下搅拌10‑12h，过滤收集滤液，重复2‑3次；将上述每次收集得到的滤液合并，在50℃下抽真空减压浓缩，在流动水中透析48h；步骤2：向步骤1得到的透析袋的溶液加入4倍体积的乙醇，在4℃下保存10‑12h；然后用高速离心机在5000rpm离心10min，收集其中的沉淀物，依次采用乙醇、丙酮和乙醚进行洗涤，在40‑45℃真空干燥6h，得到棕褐色秦巴绞股蓝粗多糖；步骤3：将粗多糖加双蒸水配成浓度为5％的水溶液，用1mol/L HCl调节pH为5.5，加入粗多糖质量1/20的木瓜蛋白酶在65℃恒温下搅拌3h后加热至100℃终止酶反应；步骤4：加入双蒸水将步骤3得到的溶液稀释至0.5％，滴加浓氨水将pH值调至8.0，于50℃边搅拌边逐渐加入30％H2O2，搅拌3～5小时至溶液颜色变为较透明的淡黄色，停止搅拌在50℃下抽真空减压浓缩；步骤5：向步骤4得到的浓缩液加入其体积1/5的sevag试剂，震荡20min，放入高速离心机中在5000rpm离心15min；离心完后收集上清液，再加入其体积1/5sevag试剂，重复5次；将得到的上清液用蒸馏水透析48h，收集透析袋中的溶液，加入其4倍体积的乙醇，在4℃放置10‑12h；放入高速离心机中在5000rpm离心 10min，离心完后收集沉淀，依次分别用乙醇、丙酮和乙醚洗涤，冷冻干燥12h，得到白色绞股蓝精制多糖；步骤6：将精制绞股蓝多糖1g溶于50mL双蒸水，5000rpm离心15min，取上清，上DEAE‑52 cellulose柱，上样量为交换容量的10％～20％；步骤7：将上述的离子交换柱依次用双蒸水、0～1mol/L NaCl溶液线性梯度洗脱，收集合并第一流出物的蒸馏水洗脱液，在50℃下减压浓缩，蒸馏水透析48h，冷冻干燥得到绞股蓝中性多糖。 |
