泛激酶活化与信号通路的评估

摘要

本发明提供了用于测定信号转导途径信号蛋白的方法和试剂。本领域需要一种能准确检测信号转导抑制剂在患者体内效率的测试方法，也需要其它检测和监控一些与信号转导途径信号蛋白的异常活化有关的疾病或紊乱的方法。本发明提供了一种高灵敏度的分析方法，该方法还可用于难以在其体内获得大量样品的患者群体例如新生儿。

主权项

一种测定在含有白细胞的样品中信号转导途径信号蛋白的激活状态的方法，包括：a)将含有白细胞的样品暴露于泛激酶激活剂，以激活该样品的白细胞中的至少一种信号转导途径中的可激活蛋白；b)用保存剂保存激活后的样品；c)将所述样品中被保存白细胞的胞内表位解掩蔽；d)使被保存的白细胞中解掩蔽的胞内表位与多个经荧光标记的捕捉分子相接触，所述多个捕捉分子包括至少两种不同的捕捉分子和至少一种对照捕捉分子，所述至少两种不同的捕捉分子能结合至所述样品中被保存、被激活的白细胞中至少两个不同的解掩蔽的胞内表位的激活态，其中所述对照捕捉分子可结合至位于被保存的白细胞上未被泛激酶激活剂激活的表位上；e)检测由于所述捕捉分子结合至解掩蔽胞内表位的激活态而捕捉到的被保存、被激活的白细胞的荧光性；f)检测因所述对照捕捉分子结合而捕捉到的被保存的白细胞的荧光性；以及g)比较由所述捕捉分子捕捉的被保存、被激活的白细胞所检测到的荧光性和由所述对照捕捉分子捕捉的被保存的白细胞所检测到的荧光性。