改变反馈敏感度的重组酶

摘要

本发明涉及具有改变的反馈敏感度的重组高丝氨琥珀酰基转移酶(MetA*)、以及最终具有降低活性的重组S-腺苷甲硫氨酸合成酶(MetK*)在生产甲硫氨酸、其前体或其衍生产物中的用途。

主权项

在用微生物发酵过程中制备甲硫氨酸、其前体或其衍生产物的方法，在此过程中L‑高丝氨酸经高丝氨酸琥珀酰基转移酶转化为O‑琥珀酰高丝氨酸，所述方法包括以下步骤：在适宜培养基上培养所述微生物并回收生成的甲硫氨酸、其前体或其衍生产物，其中所述高丝氨酸琥珀酰基转移酶是突变型高丝氨酸琥珀酰基转移酶，该突变型高丝氨酸琥珀酰基转移酶对反馈抑制剂S‑腺苷甲硫氨酸和甲硫氨酸的敏感度降低；并且和野生型序列相比，所述突变型高丝氨酸琥珀酰基转移酶在以下非突变保守区域之一及其组合中包含至少1个氨基酸突变：与如SEQ ID NO.1所示大肠杆菌MetA氨基酸序列中第25‑31位氨基酸T‑S‑R‑A‑S‑G‑Q相对应的保守区域1，与如SEQ ID NO.1所示大肠杆菌MetA氨基酸序列中第59‑66位氨基酸S‑N‑S‑P‑L‑Q‑V‑D相对应的保守区域2，和与如SEQ ID NO.1所示大肠杆菌MetA氨基酸序列中第293‑299位氨基酸V‑Y‑Q‑T‑T‑P‑Y相对应的保守区域3，所述突变如下：将保守区域1中的保守性丙氨酸替换为缬氨酸，将保守区域2中的保守性氨基酸L和/或Q替换为其它氨基酸，以及将保守区域3中的保守性氨基酸Q替换为另一种氨基酸，并且其中修饰的保守区域1包含氨基酸序列T‑S‑R‑V‑S‑G‑Q，和/或修饰的保守区域2包含选自S‑N‑S‑P‑F‑Q‑V‑D、S‑N‑S‑P‑F‑E‑V‑D、S‑N‑S‑P‑F‑D‑V‑D、S‑N‑S‑P‑L‑E‑V‑D以及S‑N‑S‑P‑L‑D‑V‑D的氨基酸序列。