Method of detecting RNA molecules that are polyadenylated at 3?-terminus and RNA molecules that comprise inside the chain sections of adenines following tightly each other by making use of 5-bromo-2?-deoxyuridine, 5-iodo-2?-deoxyuridine and 5-chloro-

摘要

Popsaný zpusob dovoluje efektivne detekovat polyadenylované molekuly RNA a molekuly RNA, které obsahují uvnitr retezce úseky tesne za sebou následujících adeninu, prostrednictvím znacení vznikajících DNA in situ a to jak v permeabilizovaných bunkách a tkáních, tak na rezech bunek a tkání. Umožnuje specifické odhalení produktu reverzní transkriptázy v RNA-DNA duplexech a jejich maskování v DNA-DNA duplexech. Prístup je založen na použití 5-bromo-2´-deoxyuridinu, 5-iodo-2´-deoxyuridinu a 5-chloro-2´-deoxyuridinu ve forme nukleosidtrifosfátu, které jsou v prípade imunodetekce "neviditelné" v DNA-DNA duplexu, avšak lehce odhalitelné v DNA-RNA duplexu. Uvedené nukleosidy v reakci reverzní transkripce vážou vznikající komplementární retezec DNA k predlohovému retezci RNA silneji, než by bylo možné bez jejich prítomnosti. V dalším kroku jsou pak polyadenylované molekuly RNA a molekuly RNA, obsahující uvnitr retezce úseky tesne za sebou následujících adeninu, lokalizovány pomocí detekce komplementárního retezce DNA.