一种固定化南极假丝酵母脂肪酶B的工艺方法

摘要

本发明是一种固定化南极假丝酵母脂肪酶B的工艺方法。它是以有机溶剂为固定介质，在微水相中实现脂肪酶固定化的方法，包括以下步骤是：1)树脂的预处理；2)固定化酶的制备：将预处理过的树脂加入到反应器中，再加入有机介质，静置后加入酶原溶液，加入量为质量比南极假丝酵母脂肪酶B∶树脂＝1∶60～100密封后放置到恒温水浴摇床中，25～35℃，条件下1～3h，然后真空冷冻干燥即得。本发明制备固定化酶的方法，游离酶用量小，固定化效率高，避免了水相吸附法造成的游离酶的大量浪费，从而降低了固定成本；载体廉价易得；工艺简单，条件温和，对酶活性损失小，酶活回收率可达到83.3％。

主权项

一种固定化南极假丝酵母脂肪酶B的工艺方法，其特征为包括以下步骤：1)树脂的预处理：将树脂浸泡在体积百分浓度为95％乙醇中24h，取出后用蒸馏水冲洗干净；再放入质量百分浓度2％的NaOH溶液中浸泡4h，取出后用蒸馏水洗至中性；再在质量百分浓度5％HCL溶液中浸泡4h，蒸馏水洗至中性，然后在40℃下干燥15h；所述树脂为：树脂S‑8、AB‑8、NKA‑9、X‑8、NKA或D4020；2)固定化酶的制备：将上步预处理过的树脂加入到反应器中，再加入有机介质静置1h，加入量为12～20mg树脂/每mL有机介质，然后向其中加入按照配比为1mg南极假丝酵母脂肪酶B溶解于50～100μL、pH值为5～7的磷酸盐缓冲液中配制得到的酶原溶液，加入量为质量比南极假丝酵母脂肪酶B∶树脂＝1∶60～100，振荡均匀，将反应器密封后放置到恒温水浴摇床中，在温度25～35℃，摇床转速100rpm的条件下吸附固定1～3h，然后倾析出有机溶剂，剩余固体真空冷冻干燥24h即得固定化南极假丝酵母脂肪酶B；所述有机介质为异辛烷、庚烷或正己烷。