一种海洋贝类卵细胞石蜡切片方法

摘要

本发明涉及到一种海洋贝类卵细胞的石蜡切片方法，其包括固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色、封片等步骤，其特点是克服了贝类卵子体积小而难以浸蜡和包埋的问题，改进了苏木精-伊红染色方法，获得了良好的切片和染色效果。本方法简单易行，毋需增加仪器设备，可对直径≥40微米的大多数海洋贝类的卵细胞进行石蜡切片，其中脱水、透明、透蜡步骤间均有过渡步骤，多为两步处理，使试剂逐渐完全地进入组织，完好地保存组织的原有结构，为贝类受精及早期胚胎发育研究提供了有效的研究手段。

主权项

一种海洋贝类卵细胞的石蜡切片方法，其特征在于包括下述步骤：①样品固定：先用冷的Bouin氏液将样品固定20‑40min，待样品自然沉降或低速离心后，用吸管除去上清液，至少更换二次Bouin氏液，然后再用Bouin氏液固定5小时后，移入70％酒精中，置4℃冰箱中保存；②卵细胞预处理：向盛有卵细胞的离心管中加入几滴1％的伊红染液，染色1‑2分钟；用细针在称量纸上刺些小孔，然后用称量纸将染色后的卵细胞包起来，以使卵细胞在处理时不会漏出；③脱水与透明程序：将用称量纸包好的卵细胞置于脱水机或染色缸中，用梯度乙醇脱水；先后采用70％乙醇脱水50分钟、85％乙醇脱水50分钟2次、95％乙醇脱水45分钟2次、100％乙醇脱水45分钟2次；然后用体积比为1∶1的无水乙醇：二甲苯过渡处理25分钟，再用二甲苯处理20分钟2次，使之透明；④透蜡和包埋：用体积比为1∶1的二甲苯：石蜡过渡处理40分钟，52～56℃熔点的石蜡透蜡1小时2次；将纸包打开，将卵细胞置于包埋盒中，加注融蜡进行包埋；⑤切片和烤片：用生物切片机切片，切片厚度5μm，蜡带用40℃恒温水浴展片，贴于事先涂有粘片剂的载玻片上，然后在烤片机上烘干；⑥染色与封片：染色采用伊红‑苏木精复染方法，其中用苏木精染色6～8分钟，伊红染色1.5～2分钟；然后用中性树胶封片。