快速检测婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的PCR方法及试剂盒

摘要

本发明提供一种快速检测婴儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的PCR方法及试剂盒，通过比较确定从人工污染的婴儿配方奶粉中高效提取阪崎肠杆菌的方法并进行评价。以阪崎肠杆菌基因为靶基因进行扩增，构建目的重组质粒作为标准品进行定量，并构建内标重组质粒加到反应体系内与靶基因共同扩增，监测反应体系，排除假阴性。对荧光定量反应体系进行优化，并确定荧光定量方法和人工污染的检测限，并进行实际检测。本发明检测速度快，特异性好，使用步骤简单，可重复性高，可进一步实现双重或多重实时PCR，完成多种食源性致病菌的同时检测。

主权项

一种快速检测婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的PCR方法，其特征是包括以下几个步骤：(1)阪崎肠杆菌的培养；(2)制备阪崎肠杆菌基因组DNA；(3)构建阪崎肠杆菌重组质粒，作为标准品绘制标准曲线进行定量；(4)构建ompA内标重组质粒，与目的基因在同一反应体系内同时扩增，监测反应体系，排除假阴性；(5)建立分子信标荧光定量技术检测婴儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的方法，优化反应条件；(6)对3种从婴儿配方奶粉中高效提取阪崎肠杆菌的方法进行比较；(7)确定分子信标荧光定量方法的灵敏度；(8)人工污染样品，确定检测限；(9)实际检测，确定该方法的特异性、灵敏度、符合率。