基于线粒体DNA G709A单核苷酸多态性检测高原肺水肿易感性的试剂盒

摘要

本发明涉及基于线粒体DNA G709A单核苷酸多态性检测高原肺水肿易感性的试剂盒，其特征是该试剂盒包括以下分离包装的试剂：试剂一，引物混合液；试剂二，PCR反应混合液；试剂三，线粒体DNA的709位点单核苷酸多态性G对照DNA；试剂四，线粒体DNA的709位点单核苷酸多态性A对照DNA；试剂五，探针混合液；试剂六，连接反应混合液；试剂七，电泳混合液。本发明使用简单，操作方便，检测快速，能用于平原人进入高原前对高原肺水肿易感者的筛选，指导HAPE的预防和治疗，减轻急性重症高原病的威胁，有利于进入高原人群健康。

主权项

基于线粒体DNA G709A单核苷酸多态性检测高原肺水肿易感性的试剂盒，其特征是该试剂盒包括以下分离包装的试剂：试剂一，引物混合液，体积为100μl；上游引物和下游引物各50μl混合，上游引物和下游引物浓度均为10pmol/μl；序列如下：上游引物HP4‑F：5’‑ATAGGTTTGGTCCTAGCCTTTCTATTAGCT‑3’；下游引物HP4‑R：5’‑CTGCGTGCTTGATGCTTGTTCCTTTTGATC‑3’；试剂二，PCR反应混合液，体积为1000μl；成分有1×PCR buffer，2.0mMMgCl2，200mM dNTPs，1U Taq酶，余量为蒸馏水；试剂三，线粒体DNA的709位点单核苷酸多态性G对照DNA，体积为50μl，浓度为50ng/μl；试剂四，线粒体DNA的709位点单核苷酸多态性A对照DNA，体积为50μl，浓度为50ng/μl；试剂五，探针混合液，体积为120μl，三种探针各40μl混合，该三种探针浓度均为12.5pmol/μl；三种探针序列如下：①P4‑F：5’‑GATGCTTGCATGTGTAATCTTATTTTTTTTTTTTTTTT‑3’，为荧光物FAM标记；②P4‑D1：线粒体DNA的709位点为单核苷酸多态性G：5’‑TTTTTTTTTTTTTTTTATTTAGAGGGTGAACTCACTGGAAC‑3’； ③P4‑D2：线粒体DNA的709位点为单核苷酸多态性A：5’‑TTTTTTTTTTTTTTTTTTTATTTAGAGGGTGAACTCACTGGAAT‑3’；试剂六，连接反应混合液，体积为100μl；成分有pH 7.6的20mM Tris‑HCl，25mM醋酸钾，10mM醋酸镁，10mM二硫苏糖醇，1mM氧化型辅酶I，0.1％Triton X‑100，0.5μl Taq DNA连接酶，余量为蒸馏水；试剂七，电泳混合液，体积为100μl；荧光物质1×ROX和上样缓冲液6×loading buffer各为50μl。