| 摘要 |
<p>Zpusob produkce eukaryotické alkalické fosfatázy v kvasinkových bunkách zahrnující kroky: a) klonování genové sekvence eukaryotické alkalické fosfatázy do ruzných vektoru, b) transformace kvasinek vektory, c) exprese a d) purifikace alkalické fosfatázy. Pri tomto zpusobu i) první vektor má gen rezistence pro první selekcní marker, ii) transformanty, které integrovaly gen rezistence a genovou sekvenci do genomu se vybírají rustem na živném médiu obsahujícím nízkou koncentraci prvního selekcního markeru, iii) pocet kopií genu v bunkách se zvýší nekolikanásobnou transformací prvním vektorem, pricemž nekolikanásobné transformanty se vybírají rustem na živném médiu pri zvýšeném selekcním tlaku, iv) pridá se druhý vektor, který má gen rezistence pro druhý selekcní marker, v) pocet kopií genu v bunkách se zvýší nekolikanásobnou transformací, druhým vektorem, pricemž nekolikanásobné transformanty se vybírají rustem na živném médiu pri zvýšeném selekcním tlaku a vi) vyberou se pouze ty klony, které do genomu stabilne integrovaly nekolik kopií genové sekvence a geny rezistence pro selekcní markery.</p> |
