一种PCR荧光分子信标探针技术定量检测人类白细胞抗原B27基因的方法

摘要

一种人类白细胞抗原B27(HLA-B27)基因的定量检测技术，其特征是以HLA-B27基因为检测目标，应用PCR荧光分子信标探针定量检测技术，检测反应终荧光强度，在外标曲线上读出内参标准品和待测样品的PCR反应终浓度。通过计算内参标准品的扩增效率，来定量待测样品的起始拷贝数，实现HLA-B27基因的灵敏、准确、快速定量检测。可应用于强直性脊柱炎(AS)及其相关的血清阴性脊柱关节病(SpA)的临床诊断和风险预测。

主权项

一种以人类白细胞抗原B27(HLA‑B27)基因为检测目标的PCR荧光分子信标探针定量检测技术，包括以下步骤：a、在HLA‑B27基因中选择一段小于150bp的片段做为靶序列，合成一对引物；b、根据靶序列中位于两个引物之间的序列，设计合成一个荧光分子信标探针，其淬灭基团为DABCYL，荧光基团为FAM；c、构建一个引物与靶序列完全相同、片段长度与靶序列长度相似，但序列内容与靶序列不同的内参标准品。并根据内参标准品的序列，设计合成一个荧光分子信标探针，其淬灭基团为DABCYL，荧光基团为ROX。d、提取待测标本中的DNA，使用步骤a中的引物、步骤b中的探针、步骤c中的内参标准品及其探针，与其它PCR反应体系成分混合，进行PCR反应，扩增靶基因片段和内参标准品片段。e、分别检测反应结束后的FAM和ROX荧光值，根据各自外标曲线计算靶序列和内参标准品的反应终拷贝数。f、根据内参标准品的起始拷贝数和反应终拷贝数计算PCR扩增效率，根据靶序列的终拷贝数和PCR扩增效率计算靶序列的起始拷贝数。