一种检测哈维氏弧菌的试剂盒及检测方法

摘要

本发明涉及一种用环介导等温扩增技术检测哈维氏弧菌的试剂盒及检测方法。试剂盒包括环介导等温扩增反应液、Bst DNA聚合酶、显色剂；其中反应液含有反应缓冲液Thernopol、dNTP、MgSO4、上游内引物(Vh-FIP)TTCGCTTTCGCGAGCCATCTGGTTACCAATTGATCGCCCG、下游内引物(Vh-BIP)ACGCAGAATCAAGCAGTGTGCTCCGATTTATTCGCCACGACA、上游外引物(Vh-F3)CAAAACGGTTCCGAAACGC、下游外引物(Vh-B3)TCGATTCCCCAAGTTTGGAG、甜菜碱和无菌双蒸水；检测方法包括细菌DNA的提取、环介导等温扩增、显色检测等。本发明根据哈维氏弧菌toxR基因保守区设计引物，采用LAMP技术进行检测，特异性强，灵敏度高，具有快速，准确性高、灵敏性好，现场应用方便等优点，解决了现有技术中存在的周期长、灵敏度较低、成本高、现场应用困难等缺陷。

主权项

1.一种检测哈维氏弧菌的试剂盒，其试剂包括以下三组试剂：第一组试剂为用于配制等温扩增反应液的试剂，该组试剂包括Thernopol反应缓冲液、dNTP溶液、MgSO₄溶液、上游内引物(Vh-FIP)、下游内引物(Vh-BIP)、上游外引物(Vh-F3)、下游外引物(Vh-B3)、甜菜碱溶液及无菌双蒸水；所述Thernopol反应缓冲液的组成成分为pH8.8的Tris-HCl溶液、(NH₄)₂SO₄、KCl、MgSO₄及Triton X-100；所述上游内引物(Vh-FIP)为TTCGCTTTCGCGAGCCATCTGGTTACCAATTGATCGCCCG；所述下游内引物(Vh-BIP)为ACGCAGAATCAAGCAGTGTGCTCCGATTTATTCGCCACGACA；所述上游外引物(Vh-F3)为CAAAACGGTTCCGAAACGC；所述下游外引物(Vh-B3)为：TCGATTCCCCAAGTTTGGAG；并且，该组试剂中的各试剂的量及浓度足以配制出各成分具有如下工作浓度的等温扩增反应液：第二组试剂为Bst DNA聚合酶；第三组试剂为显色剂。