源于成形组织的间充质干细胞的分离和纯化方法

摘要

本发明提供了一种源于成形组织的间充质干细胞的分离和纯化方法，本方法依据成形组织中不同种类细胞的贴附能力差异，进行分时间段贴壁筛选，通过不同时间段贴附细胞的间充质干细胞特异表面抗原检定后，筛选最佳贴壁时间段的贴附细胞，并收集和悬浮细胞后，进行细胞集落形成的克隆培养，获得纯化的成形组织间充质干细胞。本发明的有益效果是：(1)本发明方法可达到比较好的分选效果；(2)对最佳贴壁时间段分选的细胞采用单个细胞克隆方法进一步提高了成形组织间充质干细胞的纯化效率；(3)经最佳贴壁时间段分选的成形组织间充质干细胞具有较高的增殖潜能；(4)经最佳贴壁时间段分选的成形组织间充质干细胞具有显著的多分化潜能。

主权项

一种源于成形组织的间充质干细胞的分离和纯化方法，所述方法包括：(1)取成形组织碎片用胶原酶消化，获得悬浮细胞，收集所述的悬浮细胞于细胞培养液a中进行贴壁培养4～10小时，收集未贴附的细胞，贴壁细胞备用；(2)将步骤(1)获得的未贴附细胞转移至细胞培养液b中贴壁培养，贴壁培养时间为步骤(1)所述的贴壁培养时间的1.5～2.5倍，再次收集未贴附的细胞，贴壁细胞备用；(3)步骤(2)获得的未贴附细胞重复步骤(2)的操作1～5次，每次各自贴壁培养时间为前一次的贴壁培养时间的1.5～2.5倍，获得不同时间段贴附的贴壁细胞；(4)对不同时间段获得的贴壁细胞分别培养扩增，并分别进行间充质干细胞特异表面抗原检定，筛选获得具有间充质干细胞表面抗原特性贴壁细胞的最佳贴壁培养时间段；(5)取在最佳贴壁培养时间段贴附的贴壁细胞，悬浮于细胞培养液c中进行克隆培养，获得纯化的成形组织间充质干细胞；所述细胞培养液a、细胞培养液b、细胞培养液c均为添加有体积含量为10％胎牛血清和2mM L‑谷氨酰胺的DMEM‑LG培养液。