快速检测16、18型人乳头瘤病毒的荧光定量PCR试剂盒

摘要

本发明公开了一种快速检测16、18型人乳头瘤病毒荧光定量PCR试剂盒，涉及一种引起人类宫颈癌及宫颈上皮内高度病变的病原体基因检测技术。该试剂盒包括DNA裂解液、荧光定量PCR反应液、HPV16&18标准阳性模板PMD18-T-HPV16&18和阴性质控标准品；所述的荧光定量PCR反应液含有16、18型人乳头瘤病毒特异性引物对和荧光探针。本发明定量准确；检测速度快；特异性好，灵敏度高；使用步骤简单，可重复性高；可同时进行高通量的样品检测。本试剂盒可对16、18型人乳头瘤病毒进行快速定性定量检测，并可替代一直沿用的传统的培养法。

主权项

一种快速检测16、18型人乳头瘤病毒的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括DNA裂解液、荧光定量PCR反应液、HPV16&18标准阳性模板PMD18‑T‑HPV16&18和阴性质控标准品；所述的荧光定量PCR反应液含有16、18型人乳头瘤病毒特异性引物对和荧光探针：16、18型人乳头瘤病毒的正向引物为5′‑SWGYWGCAGCAYTATATTGG‑3′，反向引物为5′‑ATGTTGTAWWAYWGTWWGTCTTTG‑3′，其中正向引物可向5’和3’端方向各延伸10个碱基，反向引物可向5’和3’端方向各延伸10个碱基；荧光探针序列为5′‑CAYTCWGGYGTGTCTCC‑3′，该荧光探针序列可向5’和3’端方向各延伸10个碱基，荧光探针5′端标记报告荧光基团FAM，3′端标记不发光的淬灭基团标记Eclipse，可以大大减少背景噪音的干扰；所述的HPV16&18标准阳性模板PMD18‑T‑HPV16&18是含有16、18型人乳头瘤病毒高度保守基因‑E1基因的101个碱基对的核苷酸片段构成的PMD18‑T载体，该载体在大肠杆菌DH5α中增殖。