预示区分家养和野生双峰驼DNA微卫星的标记方法

摘要

本发明是一种生物工程技术领域的预示区分家养和野生双峰驼DNA微卫星的标记方法，步骤为：采集双峰驼耳部组织样品，根据常规酚/氯仿法提取基因组DNA；利用设计的16对引物对双峰驼基因组DNA进行PCR扩增；使用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离PCR产物，根据PCR产物的长度进行基因型分类；比较不同微卫星标记基因型在双峰驼的分布，结果显示3个微卫星座位(VOLP-10、YWLL36和YWLL38)在家养双峰驼和野双峰驼间存在特异等位基因；对特异等位基因扩增产物进行克隆和测序。本发明操作简单，能从基因组分子水平上区分家养双峰驼和野生双峰驼，为双峰驼遗传和进化研究，特别是野生双峰驼的鉴定和保护，提供了重要的手段和方法。

主权项

一种预示区分家养和蒙古野生双峰驼DNA微卫星的标记方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)采集双峰驼耳部组织样品，根据常规酚/氯仿法提取基因组DNA；(2)根据已有双峰驼微卫星标记设计16对PCR引物，具体如下：CMS 9：F：TGCTTTAGACGACTTTTACTTTAC；R：ATTTCACTTTCTTCATACTTGTGAT；CMS 13：F：TAGCCTGACTCTATCCATTTCTC；R：ATTATTTGGAATTCAACTGTAAGG；CMS 16：F：ATTTTGCAATTTGTTCGTTCTTTC；R：GGAGTTTATTTGCTTCCAACACTT；CMS 18：F：GAACGACCCTTGAAGACGAA；R：AGCAGCTGGTTTTAGGTCCA；CMS 36：F：AAATTACTGAATTCCCCCCCTA；R：GTTACAACGCTCTCATTCATC；CMS 121：F：CAAGAGAACTGGTGAGGATTTTC；R：AGTTGATAAAAATACAGCTGGAAAG；vOLP 08：F：CCATTCACCCCATCTCTC；R：TCGCCAGTGACCTTATTTAGA；VOLP 10：F：CTTTCTCCTTTCCTCCCTACT；R：CGTCCACTTCCTTCATTTC；VOLP‑67：F：TTAGAGGGTCTATCCAGTTTC；R：TGGACCTAAAAGAGTGGAG；LCA 65：F：TTTTTCCCCTGTGGTTGAAT；R：AACTCAGCTGTTGTCAGGGG；YWLL08：F：ATCAAGTTTGAGGTGCTTTCC；R：CCATGGCATTGTGTTGAAGAC；YWLL 36：F：AGTCTTGGTGTGGTGGTAGAA；R：TGCCAGGTAACTGACAGTGAT；YWLL 38：F：GGCCTAAATCCTACTAGAC；R：CCTCTCACTCTTGTTCTCCTC；YWLL 59：F：TGTGCAGGAGTTAGGTGTA；R：CCATGTCTCTGAAGCTCTGGA；CMS 17：F：TATAAAGGATCACTGCCTTC；R：AAAATGAACCTCCATAAAGTTAG；CMS 50：F：TTTATAGTCAGAGAGAGTGCTG；R：TGTAGGGTTCATTGTAACA；(3)利用设计的16对引物对双峰驼基因组DNA进行PCR扩增；(4)使用8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离PCR扩增产物，根据PCR扩增产物的长度进行基因型分类；(5)比较不同微卫星标记基因型在家养双峰驼和蒙古野生双峰驼的分布，定特异基因型；(6)对特异等位基因扩增产物进行克隆和测序；通过测序比较特异基因型和非特异基因型间DNA序列，在微卫星位点VOLP 10上家养双峰驼比蒙古野生双峰驼少13个CA重复序列；通过测序比较特异基因型和非特异基因型间DNA序列，在微卫星位点YWLL36上家养双峰驼比蒙古野生双峰驼少2个GT重复序列；通过测序比较特异基因型和非特异基因型间DNA序列，在微卫星位点YWLL38上家养双峰驼比蒙古野生双峰驼多5个GA和1个GT重复序列。