用于检测人类EGFR基因突变的引物、探针及其使用方法

摘要

本发明公开了用于检测人类EGFR基因突变的引物、探针及使用方法，涉及基因突变的检测。本发明的方法包括(1)提供引物和探针；(2)待测样品处理和模板提取；(3)配制荧光PCR扩增突变基因序列的反应体系；(4)用步骤(1)的引物和探针扩增待测的突变基因靶序列；(5)利用双环探针与扩增产物的杂交，检测反应体系的FAM和HEX或ROX荧光强度作为结果的判断标准。本发明的引物、探针及方法：可同时检测EGFR基因的29缺失突变；灵敏度高；特异性强；选择性能力强；检测速度快，整个检测过程只需要90分钟。

主权项

用于检测人类EGFR基因突变的引物及探针，包括下列4组引物和探针：(1)、5′‑GAATTCAAAAAGATCAAAGTGCTGGC‑3′SEQ ID NO：15′‑CTGAATTCAAAAAGATCAAAGTGCTGA‑3′SEQ ID NO：25′‑CTGAATTCAAAAAGATCAAAGTGCTGT‑3′SEQ ID NO：35′‑TCTGGGCTCCCCACCAGAC‑3′        SEQ ID NO：4FAM‑5′‑CGTGCCGCGTTCGGCACGGTGTATAAGGACACCGT‑3′‑TAMRA SEQ ID NO：21(2)、5′‑GTTAAAATTCCCGTCGCTATCAAAAC‑3′SEQ ID NO：55′‑GTTAAAATTCCCGTCGCTATCAAAATATC‑3′SEQ ID NO：65′‑TCCCGTCGCTATCAAGGATC‑3′SEQ ID NO：75′‑CCCGTCGCTATCAAGGAGC‑3′SEQ ID NO：85′‑TCCCGTCGCTATCAAGGAAC‑3′SEQ ID NO：95′‑TTCCCGTCGCTATCAAGGAATCTT‑3′SEQ ID NO：105′‑CGGCTGCCAGACATGAGAAAAG‑3′SEQ ID NO：11FAM‑5′TTCTGCTAAAGCAGAAACTCACATCGAGATGTGA‑3′‑TAMRA SEQ ID NO：22(3)、5′‑GAAGCCTACGTGATGGCCAT‑3′SEQ ID NO：125′‑GTGGACAACCCCCACCAC‑3′SEQ ID NO：135′‑CGTGGACAACCCCCACCA‑3′SEQ ID NO：145′‑ATG GCCAGCGTGGACGGT‑3′SEQ ID NO：155′‑TGATGGCCAGCGTGTC‑3′SEQ ID NO：165′‑GAGCAGGTACTGGGAGCC‑3′SEQ ID NO：17FAM‑5′AGCCGACCTTCGGCTGCCTCCTGGAAGGAGG‑3′‑TAMRA SEQ ID NO：23和(4)、5′TGTCAAGATCACAGATTTTGGGGG‑3′SEQ ID NO：185′CAGATTTTGGGCTGGCCAAAAA‑3′SEQ ID NO：195′‑GGAAAATGCTGGCTGACCTAAAG‑3′SEQ ID NO：20FAM‑5′‑AAGTAAGCCTCCTTACTTTGCCTCCTTCTGCAAGGAGGC‑3′‑TAMRA SEQ ID NO：24。