一种海蜇基因组DNA的提取方法

摘要

本发明涉及基因工程技术，具体的说是一种海蜇基因组DNA的提取方法。具体为将海蜇用手术剪刀剪碎至无明显颗粒状组织，加入CTAB buffer、蛋白酶K，在55～56℃消化24～26小时至溶液澄清；或将海蜇置入95％的酒精中脱水并加入buffer、SDS、蛋白酶K，封口后55～56℃消化0.8～1.0小时；而后混合苯酚、氯仿和异戊醇，离心，吸上清，再加入氯仿和异戊醇混合液混匀，离心，吸上清；再在上清液中加异丙醇，沉淀10～15分钟，沉淀后取出，离心，弃去液体，并用乙醇，离心洗涤，将多余液体倒去室温自然凉干，即得到海蛰基因组DNA。采用本发明可提取高质量的海蜇全基因组DNA，且方法简单、经济、易于操作，适合在普通生物实验室中进行。

主权项

一种海蛰基因组DNA提取方法，其特征在于：1)将海蜇无性世代的海蛰螅状体用手术剪刀剪碎至无明显颗粒状组织，加入CTAB buffer 300～400ul，待用；2)将步骤1)得到的原料内加入3～5ul浓度为20mg/ml的蛋白酶K，在55～56℃消化24～26小时至溶液澄清，待用；3)在步骤2)澄清溶液中加入与其等体积的苯酚、氯仿和异戊醇的混合溶液混匀，离心，吸上清，再加入与上清液等体积的氯仿和异戊醇混合液混匀，离心，吸上清，而后向上清液中加入上清液的0.7～1倍体积的异丙醇，‑20～‑18℃沉淀10～15分钟，沉淀后取出，离心，弃去液体，并用体积浓度为70％的乙醇，离心洗1～2次，将多余液体倒去室温自然凉干，即得到海蛰螅状体的基因组DNA；其中苯酚、氯仿和异戊醇按体积份数比为25∶24∶1，氯仿和异戊醇按体积份数比为24∶1；所述CTAB buffer溶液含有1.4M NaCl，0.02M EDTA，0.1M Tris‑Hcl和2％CTAB，其中2％的含义是每100ML CTAB buffer中含有2gCTAB。