贴壁细胞三维支架培养原位冻存装置及方法

摘要

本发明涉及一种生物工程技术领域的贴壁细胞三维支架培养原位冻存装置及方法，所述装置三维复合多孔支架和配套冻存瓶。三维复合多孔支架以承载培养的贴壁细胞形式垂直叠加置入冻存瓶。三维复合多孔支架由含钙生物陶瓷原料和有机凝胶及黏合性高分子，冷冻干燥制得。利用三维复合多孔支架以静置培养或连续灌注培养方式扩增贴壁细胞，而后直接以原培养态置入冻存瓶，加入冻存保护液，即可冻存。复苏时可直接水浴后稍加去除冻存液的清洁步骤即可正常继续培养。本发明使贴壁细胞常规扩增及冻存速率快、环节少、安全性好、操作简便、存活率高，在冻存中及复苏后能良好保持原来生长状态，并可在任何时刻冻存，不受时间与日程的限制。

主权项

一种贴壁细胞三维支架培养原位冻存装置，其特征在于，包括三维复合多孔支架和配套冻存瓶，三维复合多孔支架以承载培养的贴壁细胞形式垂直叠加置入冻存瓶，其中：所述三维复合多孔支架由含钙生物陶瓷原料和有机凝胶及黏合性高分子通过二次冻干共制而成且为片状，其显微结构为疏松多孔的海绵状刚性骨架，其孔径为30‑100μm；所述冻存瓶为圆柱内腔玻璃瓶，垂直叠放两块或三块三维复合多孔支架；所述制备三维复合多孔支架，具体为：称量10gβ‑磷酸三钙加入纯水50ml，加热下搅拌30min，用超声波处理后，加入明胶、壳聚糖各25ml，另加入羧甲基纤维素钠0.5g，加热搅拌20min，得到低粘度的热熔胶；将普通滤纸在戊二醛溶液中充分浸泡，铺在平置锡箔纸上，把上下相通的片柱状模具置于其上，将上述热熔胶倾倒在模具孔内至平齐孔边缘，所有孔倒满后再在顶端附上另一张浸泡戊二醛溶液的滤纸，并用平面重物置于其上，20min后，‑20℃冷冻2小时，‑70℃冷藏过夜，冻干机内干燥30小时，取出后加10ml的硼氢化钠于每个孔，静置3小时以上，‑70℃预冷冻过夜，二次冻干30小时，制得三维复合多孔支架。