检测新霉素药物的酶联免疫试剂盒及方法

摘要

本发明提供了一种检测新霉素药物的酶联免疫试剂盒，它含有：包被有包被原的酶标板，酶标记物，新霉素特异性抗体，新霉素标准品溶液，底物显色液，终止液，浓缩洗涤液，浓缩复溶液。本发明还公开了一种应用上述酶联免疫试剂盒检测新霉素的方法，它包括步骤：首先进行样品前处理，然后用试剂盒进行检测，最后分析检测结果。本发明提供的是检测动物源性食品中如鸡肉、鸡肝、猪肉、猪肝、奶粉、鸡蛋和饲料等样品中新霉素的残留量的酶联免疫试剂盒及检测方法操作简便、费用低廉、灵敏度高、能够现场监控且适合大量样本筛查。

主权项

一种检测新霉素药物的酶联免疫试剂盒，其特征在于它含有：(1)包被抗新霉素抗体的酶标板；(2)用辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗抗体；(3)新霉素单抗体工作液；(4)新霉素标准品溶液，浓度分别为0μg/L、0.5μg/L、1.5μg/L、4.5μg/L、13.5μg/L、40.5μg/L；(5)底物显色液，由A液和B液组成，底物显色液A液为过氧化脲，底物显色液B液为四甲基联苯胺；(6)终止液：2mol/L盐酸；(7)浓缩洗涤液：0.01M，pH 7.4，含有0.8～1.2％吐温20和0.5‰叠氮化钠防腐剂的磷酸盐缓冲液；(8)浓缩复溶液：0.01～0.05mol/L、含有1％甲醇的磷酸盐缓冲液；其中，酶标板的制备方法如下：用包被缓冲液将新霉素抗体稀释成0.1‑1μg/ml，每孔加入100μl，37℃温育2h或4℃过夜，倾去包被液，用稀释20倍的浓缩洗涤液洗涤2次，每次30秒，拍干，然后在每孔中加入200μl封闭液，37℃温育2h，倾去孔内液体，干燥后用铝膜真空密封保存；上述酶标记羊抗鼠抗抗体的制备方法如下：将抗抗体与辣根过氧化物酶采用改良后的过碘酸钠法进行偶联，将传统的过碘酸钠法进行了改良，即：1)省去了氨基的封闭过程，因为能产生自身氨基连接的氨基实际很少； 2)降低了辣根过氧化物酶：抗抗体的摩尔浓度比率至2∶1，改良后的方法比传统的方法简便，对酶的活性的损失减少。