构建小球藻表达载体、转化小球藻和破壁小球藻的方法

摘要

本发明利用Ubiquitin启动子和Ω增强子为启动元件，利用硝酸还原酶基因NR构建了适于在小球藻硝酸还原酶缺失突变体中表达外源基因的表达载体。以椭圆小球藻(Chlorella ellipsoidea)硝酸还原酶缺失突变体为受体，采用一种经济、简便的小球藻PEG转化的方法将目的基因转入该突变体中。优化了转基因小球藻破壁技术，表达的外源基因具有正常的生物活性，并在无抗生素的培养基中稳定遗传。本发明的结果可应用于采用基因工程技术以椭圆小球藻硝酸还原酶突变体为载体，高效、安全的表达常规的基因工程表达系统(如大肠杆菌和酵母)不适合表达的外源基因。

主权项

一种用于小球藻硝酸还原酶基因缺失突变体中表达外源基因的表达载体，其是通过将SEQ ID NO：6的NR基因、SEQ ID NO：1的Ubiquitin基因和SEQ ID NO：5的Ω序列依次首尾连接克隆入载体质粒的多克隆位点中而获得，其中所述载体质粒选自pBin19、pGreen0029或pBI 221。