一种壳聚糖固定化蒜氨酸酶及制备大蒜素方法

摘要

本发明涉及一种壳聚糖固定化蒜氨酸酶及制备大蒜素方法。大蒜具有消炎、杀菌、抗病毒、降血压，抗氧化、抗血栓、抗肿瘤、调节机体免疫力等多种功效，具有显著的保健作用和药用价值。大蒜具有的这些功效和大蒜中的大蒜素有关。大蒜素是大蒜中的蒜氨酸酶催化蒜氨酸水解得到的含硫有机化合物，其化学名称为二烯丙基硫代亚磺酸脂。大蒜素具有接近生蒜的香气和辛辣味，纯天然，安全，健康，广泛应用于食品成味添加剂、保健食品、食用调和油等。本发明采用壳聚糖对蒜氨酸酶进行固定化，利用固定化蒜氨酸酶转化蒜氨酸生成大蒜素，提高蒜氨酸酶的稳定性和酶促反应速度，提高大蒜素得率。

主权项

一种利用壳聚糖固定化蒜氨酸酶的方法，包括以下步骤：a.壳聚糖微球的制备：将壳聚糖溶解在0.5％的醋酸溶液中，制成2％的壳聚糖溶液，用注射器将壳聚糖溶液滴加到含有10％的氢氧化钠、95％乙醇溶液中，制成2‑3mm左右的壳聚糖微球，用蒸馏水洗至中性，保存在蒸馏水中备用；b.壳聚糖的交联及微球载体的制备：取壳聚糖微球与0.5％‑5％的戊二醛溶液反应30‑60min，用无水乙醇清洗数次，再用蒸馏水洗涤3‑5次，真空抽滤干燥，得到壳聚糖微球载体，在4℃冰箱中封闭保存备用；c.蒜氨酸酶固定化：在4℃条件下，取制备好的壳聚糖微球载体加入一定量的蒜氨酸酶溶液中，中速摇床振荡3‑10h，取出后用蒸馏水洗去残留的壳聚糖微球表面的酶，至冲洗液中无酶活性检出，真空抽滤干燥，即得到固定化蒜氨酸酶，将此固定化酶浸于0.1mol/L pH为6.5的磷酸缓冲液中，在4℃保存备用；