利用透明叶片观察叶表皮和叶内部的显微结构的方法

摘要

本发明涉及一种利用透明叶观察叶表皮和叶内部的显微结构的方法，可有效解决成本低、准确地观察叶片表皮和叶内部的显微结构问题。本发明解决的技术方案是：首先，对叶片处理，清洗，再将叶片用乙醇浸泡，除去叶绿素，然后，用碱溶液浸泡，破外叶肉细胞，放入次氯酸钠中脱色，再用流水漂洗后，放入水合氯酸中，取出后，再流水漂洗，用梯度酒精脱水，脱水后，置入二甲苯中，使叶片变透明，最后，用中性树胶或水封片，然后，用光学显微镜观察并摄像，实现对叶片不同层次的内部和外部结构观察。本发明具有取材少，成本低，工作量小，成功率高，效果好，适用于对各类叶片的观察。

主权项

一种利用透明叶片观察叶表皮和叶内部的显微结构的方法，其特征在于，由以下步骤实现：(1).叶片处理：新鲜的叶片或干燥的叶片，用清水洗干净表面的灰尘，对于肥厚的新鲜叶片清洗后，徒手将叶片平切两片，干燥的叶片用水浸泡后切开，对于大的叶片切成1‑3平方厘米的小块，除去中脉，防止叶片过厚，以便能够放入高倍镜下观察微形态，当用于叶脉的观察时，由于不需要在高倍镜下观察，处理中，直接采用整个叶片；(2).乙醇浸泡，用体积浓度为95％的乙醇浸泡46‑50小时，使叶片呈浅黄绿色，目的在于去除叶绿素；(3).碱溶液浸泡，将除去叶绿素的叶片或切片放置在质量浓度为10％的NaOH溶液中浸泡，46‑50小时，使叶片完全变黑或是变褐，目的在于破外叶肉细胞；(4).用次氯酸钠脱色，将破坏叶肉细胞以后的叶片或切片放入质量浓度为20％的次氯酸钠中脱色36‑48小时，得到漂白的叶片或切片；(5).流水漂洗，将漂白后的叶片或切片放入清水中，流水漂洗3‑5分钟，在放于质量浓度为250％的水合氯醛中36‑48小时，而后进行清水流水漂洗；(6).梯度乙醇脱水，流水漂洗后，再依次分别由体积浓度为30％、50％、70％、80％、95％、100％的乙醇进行脱水；(7).二甲苯中透明后封片，脱水后的叶片或切片放入二甲苯中透明5‑10分钟，叶片变透明，用中性树胶封片成为永久封片，凉干后观察；当只做临时观察，在步骤(5)后，用水直接封片观察；(8).显微镜观察并摄像，用水或者中性树胶封片后的叶片或切片，用光学显微镜观察并摄像，通过调节焦距观察不同层次的内部和外部结构，观察下表皮时，下表皮朝上，观察上表皮时候，上表皮朝上，同时根据情况调节光线。