检测EphA2基因表达量的荧光定量PCR方法及试剂盒与应用

摘要

本发明公开了一种检测EphA2基因表达量的荧光定量PCR方法及试剂盒与应用。该方法中提供了如下引物和探针：上游引物5’-CAGGGCAAGGAAGTGGTACTG-3’，下游引物5’-TGTAGATCGGCATGTCATTCATG-3’，探针5’-FAM-CTCGGCTGGCTCACACACCCGT-TAMRA-3’。通过该方法能准确、快速、定量地确定EphA2基因表达量。本发明所述方法和试剂盒应用在医学临床中，有利于医生针对患者的情况，制定治疗方案。

主权项

一种检测EphA2基因表达量的荧光定量PCR方法，其特征在于包含以下步骤：(1)设计引物和探针：上游引物F1为：5’‑CAGGGCAAGGAAGTGGTACTG‑3’下游引物R1为：5’‑TGTAGATCGGCATGTCATTCATG‑3’探针为：5’‑FAM‑CTCGGCTGGCTCACACACCCGT‑TAMRA‑3’；(2)进行逆转录反应：抽提样本的RNA，进行逆转录反应，得到cDNA；(3)进行荧光定量PCR反应：以步骤(2)得到的cDNA为模板，加入步骤(1)中所述的引物，进行荧光定量PCR反应，每个浓度设置至少3个平行；其中，设置阳性对照组、空白对照组和阴性对照组；阳性对照组的模板为SEQ ID：NO.4所示序列的重组质粒，空白对照的模板为水，阴性对照组的模板为正常人血液中的cDNA；反应条件为93℃2min；94℃45sec，55℃60sec，40个循环；(4)结果的处理：反应结束后计算机自动绘制标准曲线，根据阳性对照的拷贝数，得到EphA2基因的表达拷贝数。