有效表达核转基因的生产菌株的产生

摘要

本发明涉及在产生适合转基因在其中表达的真核细胞的方法，其包括(a)将编码响应于选择试剂的选择标记的核酸导入到细胞核中，其中所述选择标记的表达水平与对所述选择试剂的表型响应水平成正比；(b)在步骤(a)得到的细胞中选择所述选择标记的表达可检测的细胞；(c)任选地繁殖步骤(b)所选择的细胞；(d)诱变步骤(b)所选择的细胞或步骤(c)繁殖的细胞、或允许步骤(b)所选择的细胞或步骤(c)繁殖的细胞中出现自发突变；和(e)选择相比于步骤(b)得到的细胞的表达，显示出所述选择标记表达增加的细胞。本发明还涉及由本发明的方法产生的真核细胞、在由本发明方法产生的细胞中生成目标化合物的方法，其包括(a)将编码(i)目标化合物，其是蛋白质或RNA；或(ii)合成所述目标化合物的必要蛋白质；并且任选地响应于选择试剂的选择标记的核酸导入到所述细胞中；(b)在细胞中表达所述蛋白质；和(c)分离产生的目标化合物；以及试剂盒，其包括(a)可由本发明的方法得到的细胞，以及任选地在所述细胞中蛋白质表达优化的载体；或(b)本发明的细胞。

主权项

产生适合转基因在其中表达的真核细胞的方法，包括：(a)将编码响应于选择试剂的选择标记的核酸导入到细胞核中，其中所述选择标记的表达水平与对所述选择试剂的表型响应水平成正比；(b)在步骤(a)得到的所述细胞中选择所述选择标记的表达可检测的细胞；(c)任选地繁殖步骤(b)选择的所述细胞；(d)诱变步骤(b)选择的所述细胞或步骤(c)繁殖的所述细胞、或允许步骤(b)选择的所述细胞或步骤(c)繁殖的细所述胞中出现自发突变；(e)选择与步骤(b)得到的所述表达相比，显示出所述选择标记表达增加的细胞。