可溶性CD40L刺激人外周血B细胞长期培养方法

摘要

本发明涉及一种利用可溶性CD40配体(sCD40L)刺激人外周血B细胞的长期培养方法。本发明无菌收集人外周血，淋巴细胞分离液分离人外周血，将人外周血单个核细胞置于由含10％人AB血清、转铁蛋白、胰岛素组成的培养液中重悬细胞，放入孵育箱内培养，加入2ug/ml的sCD40L、CsA625ug/ml、2ng/ml的IL-4继续刺激培养。解决了现有方法存在的引入外源性的细胞，增加实验的干扰因素，无法供应临床的缺陷。本发明采用CD40配体体外刺激人外周血B细胞可产生B细胞大量持续培养，能从20ml外周血单个核细胞中持续大量培养B细胞。培养活化后的B细胞可以高表达MHC I、MHC II、CD80、CD86等抗原递呈的必需分子，有效提呈肿瘤细胞裂解物、抗原肽、抗原cDNA，甚至RNA，诱发特异性细胞免疫反应。

主权项

可溶性CD40L刺激人外周血B细胞长期培养方法，其步骤为：(1)无菌收集人外周血；(2)淋巴细胞分离液分离人外周血，得人外周血单个核细胞；(3)将人外周血单个核细胞置于由含10％人AB血清、转铁蛋白、胰岛素组成的培养液中重悬细胞；(4)放入5％CO2、37℃、饱和湿度的孵育箱内培养；(5)加入2ug/ml的sCD40L、CsA 625ug/ml、2ng/ml的IL‑4继续刺激培养。