一种土壤胞外蛋白质的提取分离方法

摘要

本发明提供了一种土壤胞外的蛋白质提取分离方法，该方法采用土壤的柠檬酸钠提取液，经Tris-饱和酚、甲醇-醋酸铵等进一步进行胞外蛋白质的提取，然后通过双向电泳分离。提取的土壤胞外蛋白质经SDS-PAGE检测后条带、蛋白质点清晰，是国际上首次提出的土壤胞外蛋白质的提取分离方法。

主权项

一种土壤胞外蛋白质的提取分离方法，其特征在于：所述方法的具体步骤如下：（1）土壤胞外蛋白质提取：称取4‑6g土壤于50mL的离心管中，加入0.05mol/L，pH8.0的柠檬酸钠缓冲液16‑24mL，于漩涡振荡器中振荡3‑4小时，期间每隔15分钟置于冰上冷却5分钟，16000rpm离心30min；取上清液过0.45μm的滤膜，取滤液添加pH为8.0的Tris‑饱和酚8‑12mL，置于漩涡振荡器中振荡5‑20min，静置25‑50min，16000rpm离心30min；取下层酚相，加入5倍体积预冷至4oC的0.1mol/L甲醇‑醋酸铵溶液，置于‑20oC条件下沉淀、过夜，然后16000rpm离心30min；弃上清液，用10‑15mL甲醇洗涤沉淀，16000rpm离心30min，去除上清液，用10‑15mL丙酮洗涤沉淀2次，每次洗涤后于16000rpm离心30min；将沉淀于超净台中吹干，获得蛋白质干粉；（2）土壤胞外蛋白质分离：取1.2mg蛋白质干粉，加入300μl蛋白质裂解液，制成蛋白质样品，进行双向电泳分离。