新城疫病毒LAMP检测试剂盒及其检测方法

摘要

本发明涉及一种用环介导等温扩增(LAMP)技术快速检测新城疫病毒的试剂盒及检测方法。本发明含有10×等温反应缓冲液、AMV 8U/μl、Rnasin 40U/μl、Bst DNA聚合酶8U/μl、10mM dNTP、100mM硫酸镁、20μM内引物1、20μM内引物2、10μM外引物1、10μM外引物2和5M甜菜碱的反应液A和反应液B：1000×的荧光染料SYBR GreenI。通过对组织样品中RNA、家禽咽喉及泄殖腔棉拭子样品中RNA提取、新城疫病毒的环介导等温扩增、扩增产物的显色检测，从而检测出新城疫病毒。解决了现有技术时间长、工作量大、交叉污染、操作复杂等缺陷。本发明具有特异性强、灵敏度高、快速且成本低、操作方法更简单，适于现场快速检测。

主权项

一种新城疫病毒LAMP检测试剂盒，包括以下成分：(1)反应液A：含有10×等温反应缓冲液、AMV 8U/μl、Rnasin 40U/μl、Bst DNA聚合酶8U/μl、10mM dNTP、100mM硫酸镁、20μM内引物1、20μM内引物2、10μM外引物1、10μM外引物2和5M甜菜碱，其中：10×等温反应缓冲液含有200mM三羟基甲基氨基甲烷盐酸盐/pH8.8、100mM氯化钾、100mM硫酸铵、20mM硫酸镁和1％曲拉通X‑100；内引物1为：TCCTTAAGCCGGAGGATGTTGGTTTTGCAACAGCTGCACAGATAAC内引物2为：ACTGACGGATTATCACAACTAGCTTTTGGTCATTAACAAACTGCTGCA外引物1为：TTATYGGYRGTGTRGCTCT外引物2为：TCRGTTAGGTAYARGTTGAG反应液A每管23μl，其组成为：2.5μl 10×等温反应缓冲液、1.0μl AMV8U/μl、0.25μl Rnasin40U/μl、1.0μl Bst DNA聚合酶8U/μl、1.5μl 10mM dNTP、1.5μl100mM硫酸镁、2.0μl 20μM内引物1、2.0μl 20μM内引物2、0.5μl 10μM外引物1、0.5μl 10μM外引物2、5.0μl 5M甜菜碱和5.25μl DEPC处理水；(2)反应液B：1000×的荧光染料SYBR Green I。