一种恩拉霉素完全抗原的合成方法

摘要

一种恩拉霉素完全抗原的合成方法，属于有机化学及免疫化学技术领域。本发明以恩拉霉素为半抗原，用戊二醛法将其与载体蛋白BSA偶联，用分光光度法测定偶联物的偶联比。本发明成功合成了恩拉霉素的人工抗原，合成步骤简洁，有效，完全用于酶免疫分析，为相关的酶免疫分析的检测快速、操作简便、降低成本提供技术基础。

主权项

恩拉霉素完全人工抗原的合成：配制A液：称取71.64g磷酸氢二钠(Na2HPO4·2H2O)，用重蒸水配制成1000mL溶液，浓度为0.2mol/L，置于4℃下保存备用；配制B液：称取31.21g磷酸二氢钠(NaH2PO4)，用重蒸水配成1000mL溶液，浓度为0.2mol/L，置于4℃下保存备用；配制C液：取A液72.0mL、B液28.0mL于250mL三角瓶中，配成pH7.2的磷酸盐缓冲溶液(PBS)，置于4℃下保存备用；配制D液：用移液管吸取0.25mL戊二醛液体，将其配成100mL溶液，得0.25％的戊二醛溶液，置于4℃下保存；配制E液：配制含碳酸钠(Na2CO3)10g/L及乙二胺四乙酸二钠(EDTA)1mol/L的碱性EDTA溶液，置于4℃下保存，以备处理透析袋；称取恩拉霉素20mg盛于100mL锥形瓶中，称取牛血清蛋白BSA20mg于5号试管中。向试管中加入C溶液约3mL，待牛血清蛋白BSA完全溶解后转移到有恩拉霉素的锥形瓶中，再用C溶液洗涤试管，将牛血清蛋白BSA完全移入锥形瓶，共用C溶液10mL。待恩拉霉素基本溶解后，向锥形瓶中加入1，4‑二氧六环10mL，混匀。将磁力搅拌器放入反应器后把锥形瓶放在一个含少量水的大烧杯中，再将烧瓶置于25℃水浴，开启搅拌器，约5min后，保持搅拌状态，向反应器内逐滴加入D溶液5mL，滴加完毕后仍保持搅拌状态，反应4h，即得恩拉霉素完全抗原混合液；透析袋前处理：取20cm的透析袋，将其置于E溶液中，于沸水中煮沸30min，稍冷后用蒸馏水冲洗3min将其洗净，另取100cm长的棉线一根，用其一端将透析袋的一端扎紧，保证不会漏液，保存在4℃去离子水中备用；透析：将恩拉霉素完全抗原混合液由漏斗口转移至透析袋内，且将透析袋封口，悬于盛有适量蒸馏水的大烧杯中，在4℃冰箱内开始透析，透析72h，每天换水2次，最后使用冷冻干燥法将透析袋中的液体制成粉末，即得到恩拉霉素完全抗原：恩拉霉素‑牛血清白蛋白；