固体5’-磷酸二酯酶及其制备方法和应用

摘要

本发明提供了一种固体5’-磷酸二酯酶及其制备方法和应用，制备方法包括如下步骤，(1)液体酶浓缩液的提取，(2)在步骤(1)提取的液体酶浓缩液中加入沉淀剂，收集糊状5’-磷酸二酯酶沉淀物，(3)然后将沉淀物对重量浓度对0～1％的甘油水溶液透析，(4)将透析液喷雾干燥，即可获得5’-磷酸二酯酶粉末。上述方法制备的固体5’-磷酸二酯酶粉末，活力高达10000U/g以上，常温下保存性能稳定，且不含磷酸单酯酶和3’-磷酸二酯酶活力，应用此高活力酶可降解高浓度核糖核酸(RNA)获得高浓度5’-核苷酸。核苷酸的转化率可高达90％以上，生成的核苷类物质减少，有利于后续的分离纯化工艺，有效地提高了生产效率，降低了成本。

主权项

固体5’‑磷酸二酯酶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)液体酶浓缩液的提取；(2)在步骤(1)提取的液体酶浓缩液中加入沉淀剂，收集糊状5’‑磷酸二酯酶沉淀物；所述沉淀剂选用硫酸铵或有机溶剂，所述有机溶剂为乙醇；当沉淀剂选用硫酸铵时，其用量为在所述浓缩液达到40‑80％饱和度；沉淀时，在浓缩液加入硫酸铵，达到40％饱和度，待其完全溶解后放置1‑4小时，离心或过滤除去沉淀，然后再加入硫酸铵搅拌溶解，使硫酸铵的饱和度为80％，然后放置2‑8小时，离心或过滤可得到糊状沉淀物；当沉淀剂选用乙醇时，乙醇的重量用量为浓缩液的3～5倍；(3)然后将沉淀物对重量浓度0～1％的甘油水溶液透析，将透析液干燥，即可获得5’‑磷酸二酯酶粉末；所述干燥为喷雾干燥，进风温度为120～140℃，出风温度为70～90℃，酶液预热温度为40‑60℃。