一种人工扩繁暖地大叶藓配子体的方法

摘要

本发明公开了一种人工扩繁暖地大叶藓配子体的方法，其包括以下顺序步骤：1)将生长于自然环境中未展开叶片的暖地大叶藓配子体表面消毒后，切取茎尖接种到诱导配子体产生原丝体的培养基上，进行培养40～60天；2)将步骤1)得到的原丝体转入原丝体扩繁培养基上，进行培养40～60天；3)将步骤2)扩繁得到的原丝体转入诱导原丝体形成配子体的培养基上，进行培养40～60天。本发明首次建立了人工扩繁暖地大叶藓配子体的方法，填补了现有技术的空白；使用本发明的人工扩繁方法，极利于高度集约化和高密度工产化生产，也利于自动化控制生产；在短时间内可实现人工大量扩繁暖地大叶藓，为制药领域提供市场保障，经济效益明显。

主权项

一种人工扩繁暖地大叶藓配子体的方法，其特征在于，所述方法包括以下顺序步骤：1)将生长于自然环境中未展开叶片的暖地大叶藓配子体表面消毒后，切取茎尖接种到诱导配子体产生原丝体的培养基上，进行培养40～60天，培养条件为：温度20～25℃，光照强度2000～4000lx，光照时间10～12小时/天；所述诱导配子体产生原丝体的培养基配方为：改良Knop培养基+1.0～2.0mg/l 2，4‑二氯苯氧乙酸+0.05～0.10mg/l 6‑苄基氨基嘌呤+5～10g/l蔗糖；或者，改良Knop培养基+2.0mg/l 2，4‑二氯苯氧乙酸+5～10g/l蔗糖；或者，改良Knop培养基+0.1mg/l 6‑苄基氨基嘌呤+5～10g/l蔗糖；以上诱导配子体产生原丝体的培养基中改良Knop培养基配方为：KCl76.04mg/l、MgSO4·7H2O 828.2mg/l、KH2PO4 250.4mg/l、Ca(NO3)2·4H2O1001.3mg/l、CuSO4·5H2O 0.027mg/l、KI 0.014mg/l、ZnSO4·7H2O 0.027mg/l、H3BO3 0.309mg/l、Na2MoO4·2H2O 0.012mg/l、MnCl2·4H2O 0.198mg/l、CoCl2·6H2O 0.027mg/l、FeSO4·7H2O 27.8mg/l、Na2‑EDTA 37.3mg/l、酒石酸氨0.1151mg/l；2)将步骤1)得到的原丝体转入原丝体扩繁培养基上，进行培养40～60天，培养条件为：温度20～25℃，光照强度2000～4000lx，光照时间10～12小时/天；所述原丝体扩繁培养基的配方为：改良Knop培养基+1.0～2.0mg/l2，4‑二氯苯氧乙酸或6‑糠基氨基嘌呤+5～10g/l蔗糖，其中改良Knop培养基配方为：KCl 76.04mg/l、MgSO4·7H2O 828.2mg/l、KH2PO4 250.4mg/l、Ca(NO3)2·4H2O 1001.3mg/l、CuSO4·5H2O 0.027mg/l、KI0.014mg/l、ZnSO4·7H2O0.027mg/l、H3BO3 0.309mg/l、Na2MoO4·2H2O 0.012mg/l、MnCl2·4H2O0.198mg/l、CoCl2·6H2O 0.027mg/l、FeSO4·7H2O 27.8mg/l、Na2‑EDTA 37.3mg/l、酒石酸氨0.1151mg/l；3)将步骤2)扩繁得到的原丝体转入诱导原丝体形成配子体的培养基上，进行培养40～60天，培养条件为：温度25～30℃，光照强度3000～4000lx，光照时间12～14小时/天；所述诱导原丝体形成配子体的培养基配方为：改良White培养基+0～2.0mg/l 6‑糠基氨基嘌呤+5～10g/l蔗糖，其中改良White培养基配方为：KNO3 80mg/l、MgSO4·7H2O 720mg/l、NaH2PO4·H2O 16.5mg/l、KCl 65mg/l、Na2SO4 200mg/l、Ca(NO3)2·4H2O 300mg/l、CuSO4·5H2O 0.001mg/l、ZnSO4·7H2O 3.0mg/l、H3BO3 1.5mg/l、Na2MoO4·2H2O 0.0001mg/l、MnSO4·4H2O7.0mg/l、FeNa‑EDTA 4.588mg/l、肌醇100mg/l、烟酸0.3mg/l、盐酸硫胺素0.1mg/l、盐酸吡哆辛0.1mg/l、甘氨酸3mg/l。