主权项 |
一种提高酶活性发酵生产1,3‑丙二醇的方法,其特征在于:具体包括如下步骤:(1)菌种的选择:选择克雷伯杆菌作为菌种,先接种到LB培养机进行斜面培养;(2)LB培养基的配制:按配方比例分别称取下列物质:甘油2831g、蛋白胨0.5‑1.5g、酵母膏1.5‑2.5g、琼脂粉13‑16g、NaCl 18‑12g,放入烧杯中,加入1000ml蒸馏水并加热溶解,用NaOH溶液或HCl溶液调整溶液pH至7.0‑7.5;然后高温灭菌、搁置斜面,在温度为28‑32℃下,培养24‑48小时后,转入3‑4℃冰箱里保存备用;(3)种子培养基:在1000ml蒸馏水中,加入酵母膏1.5‑2.5g、MgSO4·7H2O0.15‑0.25g、柠檬酸0.40‑0.44g、KH2PO42.5‑3.5g,NH4Cl 1.5‑2.5g、CaCl20.08‑0.12g、甘油28‑32kg、无机离子溶液1.5‑2.5ml进行混合作为种子培养基;(4)发酵培养基:在1000ml蒸馏水中,加入酵母膏0.5‑1.5g、MgSO4·7H2O0.15‑0.25g、柠檬酸0.40‑0.44g、KH2PO4 0.5‑1.5g、NH4Cl 5.3‑5.5g、CaCl20.08‑0.12g、甘油38‑42g、无机离子溶液1.5‑2.5ml、MnCl20.01‑0.012g混合制得发酵培养基;所述的无机离子溶液为:在1000ml蒸馏水中,加入以下物质配制而成:ZnCl20.65‑0.70g、MnCl210.10‑10.20g、H3BO30.05‑0.07g、CuCl20.45‑0.50g、FeCl35.2‑5.6g、CoCl211‑15g、(NH4)6Mo7O24·4H2O 0.23‑0.27g、3mol/LH2SO418‑22ml;(5)种子制备:取经过斜面培养的克雷伯杆菌适量接入到步骤(3)培养的种子培养基中进行摇床培养,培养液的温度为30~40℃,转速80~110rpm,培养8~15小时,转入二代培养基中,培养0~12小时后加入氨基酸盐和渗透剂,调节pH为7.5~9.0,30~40℃培养5~12小时,制备二级种子备用,要求氨基酸盐和渗透剂的浓度均为0.001‑10g/L;(6)发酵培养、生产1,3‑丙二醇:将工业甘油、发酵培养基装入培养容器中,甘油的装入量为培养容器的体积的50~85%,再将步骤(5)培养的二级种子接入到该容器中,接种量为所述容器体积的2~20%,进行摇床培养,培养温度30~40℃,转速80~150rpm培养,待甘油降至一定浓度时补加甘油,发酵0~25h后加入氨基酸盐和渗透剂,氨基酸盐和渗透剂浓度范围均为0.001‑10g/L。 |