一种利用微生物发酵法从红豆杉中提取紫杉醇的方法

摘要

本发明涉及一种利用微生物发酵法从红豆杉中提取紫杉醇的方法，首先将红豆杉的枝叶粉碎成粉末状，然后将用酵母菌发酵好的发酵液浸泡红豆杉的枝叶粉末数天后，对浸泡液进行浓缩，喷雾干燥即得到高含量的紫杉醇干品。本发明方法，紫杉醇的提取时间短，纯度高，不污染环境。

主权项

一种利用微生物发酵法从红豆杉中提取紫杉醇的方法，其特征在于利用微生物发酵法从红豆杉里提取紫杉醇，具体包括以下步骤：(1)将红豆杉枝叶破碎呈粉末状；(2)LB培养基的配制：按配方比例分别称取下列物质：粉末状的红豆杉枝叶28‑31g、蛋白胨0.5‑1.5g、酵母膏1.5‑2.5g、琼脂粉13‑16g、NaCl18‑12g，放入烧杯中，加入1000ml蒸馏水并加热溶解，用NaOH溶液或HCl溶液调整溶液pH至7.0‑7.5；然后高温灭菌、搁置斜面，在温度为28‑32℃下，培养24‑48小时后，转入3‑4℃冰箱里保存备用；(3)将酵母菌接种到斜面培养基中，进行活化处理；(4)种子培养基：在1000ml蒸馏水中，加入酵母膏1.5‑2.5g、MgSO4·7H2O0.15‑0.25g、柠檬酸0.40‑0.44g、KH2PO42.5‑3.5g，NH4Cl 1.5‑2.5g、CaCl20.08‑0.12g、粉末状的红豆杉枝叶28‑32kg进行混合作为种子培养基；(5)发酵培养基：在1000ml蒸馏水中，加入酵母膏0.5‑1.5g、MgSO4·7H2O0.15‑0.25g、柠檬酸0.40‑0.44g、KH2PO4 0.5‑1.5g、NH4Cl 5.3‑5.5g、CaCl20.08‑0.12g、粉末状的红豆杉枝叶38‑42g、MnCl2 0.01‑0.012g混合制得发酵培养基；(6)种子制备：取步骤(3)活化后的酵母菌适量接入到步骤(4)培养的种子培养基中进行摇床培养，培养液的温度为30～40℃，转速80～110rpm，培养24～48小时，转入二代培养基中，调节pH为7.5～9.0，30～40℃培养5～12小时，制备二级种子，备用；(7)发酵培养：将发酵液装入发酵罐内，装载量为50‑85％，将步骤(6)制备的二级种子接入其中，接种量为10～20％，再将粉末状的红豆杉枝叶装入其中，温度30～40℃，搅拌速率80～110rpm条件下进行发酵，控制发酵液的pH值为6～8，发酵4‑7天；(8)将发酵好的发酵液通过离心分离，收集上层液体；(9)将收集的液体进行低温浓缩，喷雾干燥，得到高含量的紫杉醇干品。