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一种基于PCR扩增反应的T载体的简易制作方法，其特征在于包括如下工艺步骤：对克隆型出发载体A的一处碱基进行突变获得出发载体B，再分别以克隆型出发载体A和出发载体B为模板设计合成引物，利用合成引物分别进行PCR扩增反应，扩增出的产物等量混合、变性复性即形成T载体；其中，所述的对出发载体A的一处碱基进行突变获得出发载体B包括如下步骤：A、获得出发载体以克隆载体为出发载体A，利用点突变技术，将其克隆位点处上的一个突变点碱基T或A突变为A或T，获得出发载体B；所述的再分别以出发载体A和B为模板设计合成引物包括如下步骤：B、设计合成引物分别合成两对引物：第一对引物设计时以出发载体A为依据，其正义引物的5′端第一碱基为突变点碱基T或A右侧的第一个碱基，随后的碱基和出发载体A的序列相同，其反义引物的5′端的第一碱基为突变点碱基T或A的互补碱基，随后的碱基和出发载体A序列一致；第二对引物设计时以出发载体B为依据，其正义引物的5′端第一碱基为突变点碱基A或T，随后的碱基和出发载体B序列一致，其反义引物的5′端第一碱基为突变点碱基A或T的互补碱基左侧的第一个碱基，随后的碱基和出发载体序列B一致；所述的利用合成引物分别进行PCR扩增反应包括如下步骤：C、PCR扩增分别进行两组PCR扩增，一组以出发载体A为模板，采用步骤B中的第一对引物进行PCR扩增；另一组以步骤B中的出发载体B为模板，采用步骤B中的第二对引物进行PCR扩增；所述的扩增出的产物等量混合、变性复性即形成T载体包括如下步骤：D、T载体的获得纯化得到的PCR扩增的产物，测定PCR产物含量，将两PCR扩增产物等量混合，变性复性，即得到T载体。 |
