发明名称 |
结合藻红胆素的藻蓝蛋白类荧光蛋白质的制备方法 |
摘要 |
本发明公开了一种结合藻红胆素(PEB)的藻蓝蛋白类荧光蛋白质的制备方法,是通过应用藻胆蛋白beta155裂合酶催化藻红胆素与藻蓝蛋白类脱辅基蛋白共价结合,制备结合PEB的藻蓝蛋白类荧光蛋白质。本发明的方法应用生物过程生产藻蓝蛋白类荧光蛋白质,是一种环境友好的生产方法,藻蓝蛋白类荧光蛋白质能应用于食品、保健与医药功能材料领域,特别是应用为生物和医学分子监测领域的荧光探针。 |
申请公布号 |
CN101475950B |
申请公布日期 |
2011.05.25 |
申请号 |
CN200810025626.2 |
申请日期 |
2008.01.03 |
申请人 |
广州天宝颂原生物科技开发有限公司;华中科技大学 |
发明人 |
赵开弘;周明;夏坤;佟顺刚 |
分类号 |
C12N15/60(2006.01)I |
主分类号 |
C12N15/60(2006.01)I |
代理机构 |
广州市南锋专利事务所有限公司 44228 |
代理人 |
刘媖 |
主权项 |
一种结合藻红胆素的藻蓝蛋白类荧光蛋白质的制备方法,其特征在于包括下述步骤:(1)用基因工程方法,将beta155裂合酶基因克隆于pETDuet‑1载体中,得到beta155裂合酶表达质粒;(2)用基因工程方法,将藻蓝蛋白类脱辅基蛋白基因克隆于pET30载体中,得到脱辅基蛋白表达质粒;(3)用基因工程方法,将藻红胆素生物合成酶基因ho1和pebB克隆于pCDFDuet‑1载体中,得到ho1和pebB表达质粒;(4)用基因工程方法,将藻红胆素生物合成酶基因pebA克隆于pACYCDuet‑1载体中,得到pebA表达质粒;(5)将beta155裂合酶表达质粒、脱辅基蛋白表达质粒、ho1和pebB表达质粒及pebA表达质粒依次转入配套的宿主菌,当这些表达质粒都转入宿主菌后,得到相应的工程菌,应用此工程菌通过发酵工程生产结合藻红胆素的藻蓝蛋白类荧光蛋白质;发酵后,按常规蛋白质提纯技术,提纯得到相应的结合藻红胆素的藻蓝蛋白类荧光蛋白质;以上各步骤中所述的宿主菌为大肠杆菌,所述的beta155裂合酶基因是指Anabaena sp.PCC7120中al l5339基因,所述的藻蓝蛋白类脱辅基蛋白基因是指Anabaena sp.PCC7120或M.laminosus sp.PCC7603中cpcB基因,所述的藻红胆素生物合成酶基因ho1是指Anabaena sp.PCC7120中的ho1基因,所述的藻红胆素生物合成酶基因pebA和pebB分别是指Calothrix sp.PCC7601中pebA和pebB基因。 |
地址 |
510663 广东省广州市科学城揽月路80号广州科技创新基地D区416房 |