| 主权项 |
一种五味子内生真菌的分离筛选方法，其特征是包括以下步骤：(1)五味子组织的准备：采集五味子根、茎、叶、果实；(2)五味子组织的表面消毒与无菌检测：将步骤(1)五味子组织经表面消毒后，直接种植于PDA培养基平皿上，置26‑28℃恒温箱培养，从中选出表面无任何菌种生长的组织；(3)五味子组织内生真菌的分离培养：将步骤(2)的无菌组织在无菌条件下切割成小片移植于PDA培养基上，置26‑28℃恒温箱培养，至样品周围长出菌丝时，采用尖端菌丝挑取法，挑取形态不同的菌落，经纯化后转接到PDA斜面培养基备用；(4)内生真菌液体发酵培养基的配制：其各组分与每升所含的质量为蛋白陈0‑3g、玉米浆1‑10mL、麦麸15‑40g(煮30min取汁)、葡萄糖5‑30g、MgSO4 1‑3g、KH2PO41‑5g；(5)内生真菌发酵培养：将步骤(4)液体发酵培养基分装在三角瓶中，用接种钩挑取少许经步骤(3)分离纯化的内生真菌菌丝于培养瓶中，置26‑28℃下摇床，200r/min，振荡培养4‑5天，发酵液经5000r/min离心10min，取发酵上清液；(6)有效菌株筛选：取步骤(5)各上清液用乙酸乙酯萃取，萃取物减压浓缩后用于抗肿瘤活性筛选，MTT法检测细胞抑制率；(7)菌种的保藏：将步骤(6)筛选出的高效抗肿瘤内生菌菌株进行保藏，备用。2、根据权利要求1所述的方法，其特征是所述的液体发酵培养基各组分与每升所含的质量为蛋白脉2g、玉米浆8mL、麦麸30g(煮30min取汁)、葡萄糖20g、MgSO41.5g、KH2PO43g。 |
