蜜环菌液体发酵产物HPLC指纹图谱的建立方法

摘要

本发明提供一种有关蜜环菌高效液相指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱。涉及蜜环菌发酵产物质量管理与质量控制。通过对10批次蜜环菌液体深层发酵产物的HPLC指纹图谱进行比较，利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对所得数据和谱图进行处理，得到蜜环菌发酵产物标准指纹图谱。该方法操作简便、结果稳定可靠、精密度高、重现性好等特点。建立的标准指纹图谱能有效地表征蜜环菌发酵产物的质量，为蜜环菌的质量控制与真伪鉴别提供了一种全新有效的方法。

主权项

一种蜜环菌发酵产物高效液相指纹图谱的建立方法，其特征在于包括如下步骤：(1)对照品溶液的制备：称取尿苷、腺苷和5‑羟甲基糠醛三种对照品加甲醇溶解，作为对照溶液备用；(2)样品溶液的制备：蜜环菌发酵终止后，通过离心将菌丝体与发酵液分离，菌丝体干燥后用研钵研碎成粉末状，过筛，称取蜜环菌粉末，加入甲醇超声提取，放置过夜后再次超声提取；滤过，减压干燥，用蒸馏水溶解，过滤，滤液即为供试样品；(3)测定：分别将对照品溶液和供试样品溶液注入高效液相系统，检测波长254～300nm；以三氟乙酸‑水‑甲醇为流动相进行梯度洗脱，体积流量1mL/min，采集45min检测数据；(4)以对照品色谱峰为参照，根据中药色谱指纹图谱软件对所得数据和谱图进行处理，得到蜜环菌发酵产物标准指纹图谱；其中：色谱条件为：ZORBAX SB‑C18色谱柱；流动相A为0.1％三氟乙酸甲醇，流动相B为0.1％三氟乙酸水溶液；梯度洗脱过程中流动相变化为0‑6min 2％流动相A等度，6‑36min2％A‑40％流动相A线性梯度，36‑45min 40％流动相A等度。